免疫熒(yíng)光染色技術(shù)是(shì)一(yī)種以(yǐ)免(miǎn)疫學(xué)為基(jī)礎，結合(hé)生(shēng)物(wù)化(huà)學技術(shù)和(hé)顯微(wēi)技術(shù)發(fā)展而(ér)來(lái)的蛋(dàn)白(bái)等分(fēn)子檢測技(jì)術(shù)。那麼(mó)你知道(dào)影響(xiǎng)免(miǎn)疫熒(yíng)光（IF）實驗結果的因素(sù)有(yǒu)哪些(xiē)嗎(má)？讓(ràng)我(wǒ)們一起(qǐ)來(lái)看(kàn)看(kàn)吧
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一，免疫(yì)熒光染(rǎn)色方法(fǎ)的(dí)選擇(zé)

免疫熒(yíng)光染色(sè)技(jì)術(shù)分為(wéi)直(zhí)接法(fǎ)和間接法。

直接法：將熒光標(biāo)記(jì)物偶(ǒu)聯在(zài)抗原/抗體(tǐ)上(shàng)，直(zhí)接與(yǔ)相應(yīng)的抗(kàng)體/抗(kàng)原反應。

間接(jiē)法(fǎ)：先用未標記(jì)的(dí)一抗與(yǔ)抗(kàng)原(yuán)充分(fēn)反應(yīng)後，再利(lì)用熒光(guāng)標(biāo)記的二(èr)抗與(yǔ)已(yǐ)經結(jié)合在(zài)抗原(yuán)上的(dí)一抗結合，達到檢(jiǎn)測(cè)抗原的(dí)目(mù)的。

二，抗體的選(xuǎn)擇(zé)

與(yǔ)目(mù)標蛋白(bái)直接(jiē)結合(hé)的一抗，在條(tiáo)件允許的條(tiáo)件下(xià)，盡(jìn)量選擇相(xiāng)同來源(yuán)的免疫原或者選擇已驗(yàn)證(zhèng)種屬(shǔ)反應性的抗體。

如果進行不(bù)同目(mù)標(biāo)蛋白(bái)的雙染(rǎn)或(huò)多(duō)染(rǎn)時，這些不同蛋白(bái)所對應(yīng)的(dí)一抗(kàng)應(yīng)該來(lái)源(yuán)於不(bù)同宿主。

單克隆抗(kàng)體與多(duō)克隆抗體，種屬免(miǎn)疫原(yuán)，反(fǎn)應性和抗(kàng)體(tǐ)的(dí)宿主來源是(shì)抗體(tǐ)選擇最主要(yào)考(kǎo)慮的因素(sù)，其直接決定著免(miǎn)疫熒(yíng)光(guāng)染(rǎn)色(sè)的背景，特異(yì)性(xìng)和成敗(bài)。熒光偶聯的二(èr)抗(kàng)應(yīng)選(xuǎn)擇(zé)與一抗(kàng)相(xiāng)對應的抗體，及(jí)抗一抗(kàng)的二抗(kàng)。

三(sān)，抗體(tǐ)保存

防止(zhǐ)熒光抗體失(shī)活，汙染以及(jí)熒光(guāng)染(rǎn)料(liào)的脫落和(hé)淬(cuì)滅。

在(zài)抗(kàng)體(tǐ)保存(cún)過程(chéng)中(zhōng)，適量(liáng)分裝(zhuāng)，避免(miǎn)反復凍融(róng)。

蛋(dàn)白極易(yì)被(bèi)塑(sù)料(liào)等(děng)吸附(fù)，如果用塑料(liào)管分裝(zhuāng)，抗體中(zhōng)應添(tiān)加(jiā)BSA等。

為防止汙染也可(kě)以添加(jiā)0.01%的硫柳汞或者0.1%的(dí)die氮(dàn)化(huà)鈉(nà)。

為防止淬滅，保存(cún)熒(yíng)光抗體(tǐ)時應該(gāi)注意避(bì)光(guāng)，可(kě)以(yǐ)利用(yòng)錫(xī)箔(bó)紙包好(hǎo)，或者放在避光(guāng)的容(róng)器中。

四(sì)，培養載體的選(xuǎn)擇(zé)

根據(jù)貼壁情況(kuàng)，細(xì)胞可(kě)分(fēn)為貼壁(bì)細胞和(hé)懸浮(fú)細(xì)胞。

貼壁細胞(bāo)一(yī)般常(cháng)用24孔細(xì)胞(bāo)培養(yǎng)板培養，接種細胞前放置(zhì)0.17mm玻璃細胞(bāo)爬(pá)片。

懸(xuán)浮細胞常用6孔板培(péi)養，免(miǎn)疫(yì)熒光染色(sè)處(chǔ)理後(hòu)，取少(shǎo)量加(jiā)在0.17mm玻(bō)璃細胞爬片(piàn)上(shàng)。

最(zuì)後將細胞爬片倒扣(kòu)到載玻片(piàn)上，封片(piàn)，放4℃保存。

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