離(lí)心(xīn)柱上有矽(guī)膠濾(lǜ)膜，在(zài)高(gāo)鹽低pH條件(jiàn)下，核(hé)酸能結(jié)合到矽(guī)膠(jiāo)膜上(shàng)，而蛋白質和(hé)其他代謝產物(wù)被(bèi)洗(xǐ)脫；後續改(gǎi)變(biàn)反應條(tiáo)件(jiàn)到低鹽高(gāo)pH來洗脫純化DNA。用(yòng)離心(xīn)柱法來(lái)提取DNA，得(dé)到(dào)的DNA質量好，純度和濃度較高。那麼離(lí)心柱(zhù)法(fǎ)提取(qǔ)DNA的(dí)實驗步驟與(yǔ)注(zhù)意(yì)事(shì)項(xiàng)有(yǒu)哪些呢(ní)？讓我(wǒ)們(mén)一(yī)起(qǐ)來(lái)看看吧！

一(yī)，實驗(yàn)步(bù)驟

1. 平衡(héng)液預(yù)處理(lǐ)

取(qǔ)一個新的(dí)吸(xī)附柱放(fàng)在收(shōu)集(jí)管(guǎn)中，懸空(kōng)加入(rù)100μL的平(píng)衡(héng)液(yè)至(zhì)離(lí)心柱中(zhōng)，12000rpm離心(xīn)1min，倒(dǎo)掉(diào)收(shōu)集管中的廢液(yè)，將(jiāng)離(lí)心(xīn)柱(zhù)放回(huí)收(shōu)集管中，備用(yòng)。

2. 處(chǔ)理材(cái)料

（1）如提取(qǔ)材料為(wéi)血液(yè)，可直(zhí)接使用200μL新鮮(xiān)，冷(lěng)凍或加入各(gè)種抗(kàng)凝(níng)劑的血液，不(bù)足(zú)200μL可加(jiā)緩衝液(yè)1補足；

（2）貼壁培養的(dí)細胞和(hé)動(dòng)物組織應先處理(lǐ)為(wéi)細(xì)胞懸(xuán)液(yè)，然(rán)後10000rpm離心1min，棄(qì)上清，加200μL緩衝液，振蕩至che底(dǐ)懸浮；

3. 加入(rù)蛋(dàn)白酶K，混(hùn)匀

（1）提取(qǔ)血(xiě)液和細胞基因組(zǔ)時(shí)，隻需(xū)加(jiā)入蛋(dàn)白(bái)酶K混(hùn)匀，即(jí)可(kě)繼續進(jìn)行下(xià)一(yī)步；

（2）提取(qǔ)組(zǔ)織基因組時，加(jiā)入(rù)蛋(dàn)白(bái)酶K混匀，需在56℃放置，直(zhí)至組(zǔ)織溶(róng)解，12000rpm離心(xīn)30s以(yǐ)去(qù)除(chú)管(guǎn)蓋(gài)內壁(bì)的(dí)水珠，再進行下一步驟。

4. 加入200μL緩(huǎn)衝液2，充分顛倒混匀，70℃放(fàng)置10min，溶液應變清(qīng)亮，12000rpm離(lí)心30s以(yǐ)去(qù)除(chú)管蓋內壁(bì)的水珠。

5. 加入(rù)200μL無(wú)水乙(yǐ)醇(chún)，充(chōng)分振蕩混匀15s，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉澱，12000rpm離心(xīn)30s以去(qù)除(chú)管(guǎn)蓋內(nèi)壁(bì)的水珠。

6. 將上一步(bù)所得溶(róng)液和絮狀沉澱(diàn)都加入(rù)一(yī)個吸附(fù)柱中（吸(xī)附柱放(fàng)入收集(jí)管中），12000rpm離心30s，倒(dǎo)掉廢液，將吸附柱放回(huí)收集管中。

7. 向(xiàng)吸(xī)附柱中加入500μL緩衝(chōng)液3（注意(yì)：使用前(qián)請(qǐng)確保已(yǐ)加入(rù)無水乙(yǐ)醇！），12000rpm離心30s，倒掉廢液(yè)，將(jiāng)吸(xī)附柱放入(rù)收集管中。

8. 向(xiàng)吸附柱中(zhōng)加(jiā)入600μL漂洗液(yè)（注(zhù)意(yì)：使用前請確(què)保已加入無(wú)水(shuǐ)乙醇(chún)！），離心30s，倒掉廢液(yè)，將吸(xī)附柱放(fàng)入收(shōu)集(jí)管(guǎn)中。

9. 重(zhòng)復操作步驟(zhòu)8。

10. 將吸附柱放回(huí)收集管中，12000rpm離心(xīn)2min，盡量(liáng)去除漂(piāo)洗液(yè)，將(jiāng)吸(xī)附(fù)柱置(zhì)於(yú)室溫(wēn)放置數(shù)分鐘，以che底晾幹(gān)吸附材(cái)料(liào)中(zhōng)殘餘的漂(piāo)洗(xǐ)液。

11. 將吸附柱(zhù)轉入(rù)一(yī)個(gè)幹(gān)淨的離心管中(zhōng)，向(xiàng)吸附膜的(dí)中間(jiān)部位(wèi)加50~100μL洗脫液(yè)，室溫(wēn)放置3~5min，12000rpm離心2min；將得到的(dí)溶(róng)液(yè)重新(xīn)放(fàng)回吸(xī)附柱(zhù)中，室溫放置(zhì)2分鐘，12000rpm離(lí)心(xīn)2min，收集DNA溶液(yè)。

12. DNA可(kě)以存放在2~8℃，若(ruò)要長時(shí)間存放(fàng)，可(kě)以(yǐ)放置(zhì)在-20℃。

二，注(zhù)意事(shì)項

1. 所有(yǒu)的離(lí)心(xīn)步(bù)驟均在室溫完(wán)成，均使(shǐ)用(yòng)台式(shì)離心機；

2. 使用(yòng)前(qián)確(què)保緩(huǎn)衝液3和漂洗液中預先加(jiā)入無(wú)水乙醇(chún)；

3. 實(shí)驗前(qián)將需(xū)要的水浴(yù)先(xiān)預熱到(dào)70℃備用(yòng)；

4. 第(dì)10步，要(yào)讓漂洗液(yè)揮(huī)發幹(gān)淨，否(fǒu)則(zé)會(huì)影(yǐng)響後續的(dí)實驗；

5. 樣品(pǐn)需要避(bì)免反復(fù)凍(dòng)融，否(fǒu)則(zé)會影響DNA的得(dé)率(shuài)。

更(gēng)多(duō)有(yǒu)關(guān)離心柱法提取DNA的(dí)實(shí)驗步驟與注意(yì)事(shì)項，請(qǐng)聯(lián)係天(tiān)津益元利(lì)康生(shēng)物(wù)科技(jì)有限公(gōng)司：