PCR反(fǎn)應的(dí)特點是具有(yǒu)較大擴(kuò)增能力(lì)與靈敏(mǐn)性，但(dàn)令(líng)人頭痛的問(wèn)題是易汙(wū)染，極其(qí)微量(liáng)的(dí)汙染(rǎn)即可(kě)造(zào)成(chéng)假陽性(xìng)的(dí)產(chǎn)生(shēng)。那(nà)麼(mó)你知(zhī)道(dào)PCR反(fǎn)應汙染的處(chǔ)理(lǐ)方法有哪些(xiē)嗎？讓我(wǒ)們(mén)一起來(lái)看(kàn)看吧！

一(yī)
，環境汙染

1. 稀酸處理法：對(duì)可(kě)疑器具(jù)用1mol/L鹽(yán)酸擦拭或(huò)浸泡(pào)，使殘餘(yú)DNA脫嘌(piāo)呤。

2. 紫外(wài)照射(shè)（UV）法：紫(zǐ)外(wài)波(bō)長(cháng)（nm）一般選擇(zé)254/300nm,照射(shè)30min即(jí)可(kě)。需要注(zhù)意的(dí)是，選(xuǎn)擇(zé)UV作(zuò)為消(xiāo)除殘(cán)留PCR產物(wù)汙(wū)染(rǎn)時，要考慮(lǜ)PCR產物(wù)的(dí)長度與產物序列(liè)中(zhōng)鹼基的分布(bù)，UV照(zhào)射僅(jǐn)對500bp以上(shàng)長(cháng)片段(duàn)有效，對短片(piàn)段效果不(bù)大(dà)。UV照射(shè)時，PCR產物(wù)中嘧啶(dìng)鹼基會(huì)形成二聚體，這(zhè)些二聚體(tǐ)可(kě)使延伸終止(zhǐ)，但並(bìng)不(bù)是DNA鏈中所有嘧啶(dìng)均(jūn)能形成二聚體，且UV照射(shè)還可使(shǐ)二聚(jù)體(tǐ)斷裂(liè)。形成(chéng)二聚(jù)體的程度(dù)取決(jué)於(yú)UV波長(cháng)，嘧(mì)啶二聚(jù)體的類型及與二(èr)聚體位點(diǎn)相鄰核苷(gān)酸的序列。

二(èr)
，反應(yīng)液汙染

1. DNaseI法(fǎ)：PCR混合(hé)液(yè)（未加模板(bǎn)和Taq聚合(hé)酶(méi)）加入(rù)0.5UDNaseI,室溫(wēn)反應(yīng)30min後加(jiā)熱滅活(huó)，然後(hòu)加入模(mó)板(bǎn)和Taq聚合(hé)酶進(jìn)行(háng)正常(cháng)PCR擴增(zēng)。該方法的(dí)優點是不需要知道(dào)汙(wū)染DNA的序(xù)列。

2. 內(nèi)切酶法(fǎ)：選(xuǎn)擇識別4個(gè)鹼(jiǎn)基(jī)的(dí)內(nèi)切酶(méi)（如MspI和(hé)TaqI等(děng)），可同時選擇(zé)幾(jī)種(zhǒng)，以克(kè)服(fú)用(yòng)一(yī)種酶隻能(néng)識(shí)別(bié)特(tè)定序列(liè)的缺(quē)陷，室溫作(zuò)用1h後加熱滅活進行PCR。

3. 紫外(wài)照(zhào)射(shè)法(fǎ)：未加模板和Taq聚(jù)合(hé)酶(méi)的PCR混(hùn)合液進(jìn)行紫(zǐ)外(wài)照射(shè)，注意事項(xiàng)與(yǔ)方(fāng)法同(tóng)上(shàng)述UV照射法。

4. g射綫輻(fú)射法：1.5kGy的(dí)輻射可(kě)wan全(quán)破(pò)壞(huài)0.1ng基(jī)因組DNA,2.0kGy可破(pò)壞(huài)104拷貝(bèi)的質粒(lì)分子，4.0kGy仍不(bù)影響PCR,但(dàn)高於此限度會(huì)使(shǐ)PCR擴(kuò)增效(xiào)率下(xià)降(jiàng)。引物可受照射(shè)而不(bù)影響PCR,g射綫(xiàn)是通過(guò)水(shuǐ)的離子(zǐ)化產生(shēng)自由基(jī)來破壞(huài)DNA的。

三
，固相捕獲(huò)法

用於(yú)去(qù)除標(biāo)本(běn)中(zhōng)汙染(rǎn)的核酸和(hé)雜質(zhì)，原理如(rú)下：

1. 用(yòng)生物(wù)素標(biāo)記(jì)的單鏈RNA探針與(yǔ)待(dài)擴(kuò)核酸雜交，雜交區域是非(fēi)擴(kuò)增區。

2. 用包被(bèi)鏈黴(méi)親和素的固相(xiāng)載體來捕獲(huò)帶有生物(wù)素(sù)探針(zhēn)的雜(zá)交核(hé)酸(suān)，通過(guò)漂(piāo)洗(xǐ)可(kě)去(qù)除(chú)汙染的擴(kuò)增產物(wù)和(hé)雜(zá)質。

3. 洗脫靶(bǎ)分(fēn)子後用(yòng)特異引物(wù)擴增非RNA探針(zhēn)雜(zá)交區(qū)域(yù)。第(dì)2步(bù)的(dí)漂(piāo)洗後可用(yòng)PCR檢(jiǎn)測(cè)以確(què)定標本(běn)是否(fǒu)被擴增(zēng)產物或重組質(zhì)粒(lì)汙染。

四
，抗(kàng)汙染(rǎn)引(yǐn)物法(fǎ)

該(gāi)對引(yǐn)物擴增時通過病毒DNA克(kè)隆(lóng)如入(rù)質粒的(dí)位點(diǎn)。這(zhè)一區域隻(zhī)存在完整的原病(bìng)毒(dú)中，在重組(zǔ)質粒(lì)中，這(zhè)一區域分(fēn)成兩個(gè)區(qū)域與(yǔ)克隆位點被(bèi)。如果(guǒ)重組質粒汙染了標(biāo)本，也不能(néng)擴增出任何條(tiáo)帶，即(jí)使(shǐ)出現了擴增(zēng)帶(dài)，其(qí)大小也(yě)與(yǔ)預期(qī)的(dí)不(bù)同。隻(zhī)有原(yuán)病毒DNA才能(néng)被(bèi)引物(wù)擴增(zēng)，因(yīn)此隻(zhī)要出(chū)現預期大(dà)小(xiǎo)的擴(kuò)增帶(dài)就可(kě)以(yǐ)證明(míng)標本是陽性的(dí)，該(gāi)法試用(yòng)於(yú)環狀靶分子係(xì)列(liè)。

更(gēng)多有(yǒu)關PCR反應汙染的處理方法，請聯(lián)係(xì)天津益(yì)元利康生物(wù)科技有限(xiàn)公(gōng)司：