支(zhī)原體汙染一(yī)般(bān)在顯微(wēi)鏡下不(bù)可見，很難察覺(jué)，但細胞會受(shòu)到極(jí)大的損傷，主要(yào)通過(guò)以下(xià)途(tú)徑影(yǐng)響(xiǎng)細(xì)胞生(shēng)長及功(gōng)能
。那麼支原(yuán)體汙染的(dí)檢測方(fāng)法有(yǒu)哪(nǎ)些呢(ní)？讓我(wǒ)們(mén)一起來(lái)看看吧(bā)！

一(yī)，分離(lí)培養(yǎng)法

檢測方(fāng)法：將待檢(jiǎn)樣(yàng)品接(jiē)種到適合支(zhī)原(yuán)體生長的液體培(péi)養基或固體培養基(jī)中，如(rú)有支原(yuán)體汙染，液(yè)體培養基顏色會(huì)改(gǎi)變，固體培養基將會(huì)有菌(jūn)落生(shēng)長(cháng)
。

優(yōu)點：該方(fāng)法被(bèi)稱(chēng)為(wéi)支原(yuán)體培(péi)養法(fǎ)的(dí)金標準，可以檢測絕大(dà)多(duō)數(shù)支原(yuán)體
。

缺點：支原(yuán)體生長(cháng)到一定(dìng)數量才(cái)能判斷是否(fǒu)有(yǒu)汙(wū)染(rǎn)，檢測時間(jiān)長(cháng)，無(wú)法實現(xiàn)對(duì)支原(yuán)體(tǐ)的快(kuài)速(sù)檢測

二，原(yuán)位染(rǎn)色法

檢測(cè)方法：通(tōng)過染(rǎn)色(sè)試劑(jì)（如(rú)DAPI，Hoechst 等(děng)）對(duì)待測(cè)細胞培(péi)養物(wù)進(jìn)行(háng)染(rǎn)色，在(zài)熒(yíng)光(guāng)顯微鏡(jìng)下觀察待測樣品(pǐn)的熒(yíng)光(guāng)判(pàn)斷支原(yuán)體汙(wū)染(rǎn)
。

優點：可清(qīng)晰(xī)直(zhí)觀的看到支(zhī)原體微粒
。

缺(quē)點：死(sǐ)亡(wáng)細胞釋(shì)放的(dí)DNA也(yě)會被(bèi)染色，在(zài)支(zhī)原(yuán)體輕(qīng)度汙(wū)染時，較難(nán)判(pàn)斷是否(fǒu)有支(zhī)原(yuán)體汙染(rǎn)
。

三，化學(xué)發光法

檢測方法：利用(yòng)支原體(tǐ)te有酶(méi)的(dí)活(huó)性(xìng)並通過(guò)ATP依(yī)賴的螢(yíng)光(guāng)素酶催化(huà)的發光反(fǎn)應進行(háng)檢測(cè)，通過比(bǐ)較(jiào)檢(jiǎn)測(cè)試劑加入(rù)前後(hòu)ATP量的變(biàn)化(huà)來確(què)定樣品是否有支原(yuán)體(tǐ)汙(wū)染(rǎn)
。

優(yōu)點：檢測快速，僅需15min即(jí)可(kě)完成檢測
。

缺點：該(gāi)方法隻(zhī)能檢(jiǎn)測活的支(zhī)原體(tǐ)，如(rú)果支原體死亡(wáng)，將無法(fǎ)通過(guò)ATP的(dí)變化判斷(duàn)支(zhī)原(yuán)體汙(wū)染(rǎn)
。

四(sì)，探針法(fǎ)qPCR

檢(jiǎn)測(cè)方法：設(shè)計特異性引物和熒光探(tàn)針(zhēn)，通(tōng)過探針(zhēn)法qPCR高(gāo)靈敏檢測培養(yǎng)的(dí)細(xì)胞(bāo)等(děng)生物(wù)材料(liào)中(zhōng)是否有支原體(tǐ)汙染(rǎn)
。

優點(diǎn)：靈敏度高，檢(jiǎn)測(cè)快(kuài)速，可一(yī)次性檢(jiǎn)測大量樣(yàng)品，PCR擴增後無需電泳分(fēn)析即(jí)可(kě)判(pàn)斷是否(fǒu)具(jù)有支原體汙染
。

缺點(diǎn)：該(gāi)方(fāng)法靈(líng)敏(mǐn)度(dù)很(hěn)高，因(yīn)此對實驗(yàn)環境要(yào)求(qiú)較為苛(kē)刻，且(qiě)需要精密(mì)的qPCR儀器
。

五，等溫(wēn)擴增變(biàn)色(sè)法

檢(jiǎn)測方(fāng)法：通(tōng)過(guò)設(shè)計4-6對特異性(xìng)引(yǐn)物，在一定的(dí)恒(héng)定(dìng)溫(wēn)度下，通(tōng)過添(tiān)加(jiā)不(bù)同(tóng)活性的酶和各(gè)自(zì)特異(yì)性引(yǐn)物(wù)進(jìn)行(háng)核(hé)酸的(dí)快速(sù)擴(kuò)增(zēng)，並(bìng)且(qiě)通過(guò)顏色變化而無(wú)需電(diàn)泳分(fēn)析即(jí)可確定(dìng)是否有(yǒu)支(zhī)原體(tǐ)汙染
。

優點：不需要反復的升(shēng)溫和降溫，不需要(yào)精(jīng)密的(dí)儀(yí)器，在(zài)恒(héng)定(dìng)的溫(wēn)度(dù)下(xià)即可對核(hé)酸進行(háng)擴增
。反(fǎn)應(yīng)結(jié)束後，無需電(diàn)泳分析(xī)，通過顏色變化即可判(pàn)斷是否(fǒu)具有支原(yuán)體汙染
。

缺點(diǎn)：對引物要求(qiú)較高(gāo)，需要(yào)設(shè)計多對(duì)引(yǐn)物(wù)，且(qiě)擴增(zēng)產物不能(néng)用於測序
。

更(gēng)多(duō)有關支(zhī)原體汙(wū)染(rǎn)的檢(jiǎn)測方(fāng)法有(yǒu)哪(nǎ)些(xiē)的問(wèn)題，請聯係天津(jīn)益元(yuán)利康(kāng)生物科(kē)技(jì)有限(xiàn)公(gōng)司：