免(miǎn)疫(yì)組化實(shí)驗看(kàn)似(sì)容易，但(dàn)真(zhēn)想(xiǎng)把結果(guǒ)做(zuò)漂亮(liàng)，還(huán)是(shì)需(xū)要(yào)花上很長一段時(shí)間(jiān)去積累(léi)和(hé)摸(mō)索(suǒ)經驗。一味(wèi)按照網(wǎng)上操作(zuò)流程(chéng)來做(zuò)，結果(guǒ)往往(wǎng)並(bìng)不理(lǐ)想(xiǎng)，最(zuì)終(zhōng)結(jié)果未能(néng)達到預期的(dí)效果(guǒ)。那麼(mó)如(rú)何選(xuǎn)擇免疫組化實(shí)驗(yàn)中(zhōng)的一抗呢？讓我們一起來(lái)看看吧！

一(yī)，單克隆(lóng)和多克隆抗體的(dí)選擇(zé)

存(cún)在(zài)於(yú)抗原表麵(miàn)的(dí)，決(jué)定抗原(yuán)特異性(xìng)的(dí)特(tè)殊化學基團稱(chēng)為抗(kàng)原決定(dìng)簇(cù)，又(yòu)稱(chēng)抗(kàng)原表位(wèi)。一(yī)個抗(kàng)原可以有一種(zhǒng)或多種不(bù)同的抗(kàng)原表(biǎo)位，每(měi)種(zhǒng)表(biǎo)位隻(zhī)有(yǒu)一種(zhǒng)抗(kàng)原特異(yì)性(xìng)。

用(yòng)一種包含多(duō)種抗原(yuán)決定(dìng)簇的(dí)抗原(yuán)免疫(yì)動物(wù)，可刺激(jī)機(jī)體多個 B 細(xì)胞克隆(lóng)產生針對多(duō)種(zhǒng)抗原(yuán)表(biǎo)位的(dí)抗(kàng)體，就是(shì)多(duō)克隆(lóng)抗體(tǐ)（polyclonal antibody, pAb）。由單一(yī) B 細胞克(kè)隆產生的識(shí)別(bié)一種抗(kàng)原表位(wèi)的抗體(tǐ)，稱為(wéi)單克隆抗(kàng)體（monoclonal antibodies, mAb）。

在抗(kàng)原抗體反應(yīng)中(zhōng)，一(yī)般單克(kè)隆(lóng)抗體特異性強，切片(piàn)和細胞(bāo)染色產生的背景信號(hào)更少，但親和力相(xiāng)對小(xiǎo)，檢測抗原(yuán)靈(líng)敏度(dù)相對(duì)就低(dī)；而多(duō)克隆(lóng)抗體(tǐ)特(tè)異性稍(shāo)弱，但(dàn)抗體的(dí)親(qīn)和力強，因為不依(yī)賴(lài)單(dān)一(yī)表位，因此(cǐ)其(qí)對(duì)微(wēi)小(xiǎo)抗原變(biàn)化(huà)（例如多態性(xìng)，糖(táng)基(jī)化異(yì)質性(xìng)或者輕(qīng)微變性）的(dí)包容性(xìng)更(gēng)強，靈敏度(dù)高，但(dàn)易出現非(fēi)特(tè)異(yì)性(xìng)染色（可以通(tōng)過(guò)封閉(bì)等(děng)避(bì)免）。

二，應用(yòng)範圍(wéi)的(dí)選(xuǎn)擇

有的(dí)一抗(kàng)隻能(néng)用於(yú) WB ( Western blotting）或免疫組化，免疫熒光，免疫沉澱等(děng)，必(bì)須選(xuǎn)擇(zé)能做免疫組化的(dí)抗體。

三(sān)，適用種屬的(dí)選(xuǎn)擇

這(zhè)一點很(hěn)重要，你(nǐ)的(dí)目的(dí)是檢(jiǎn)測(cè)哪個種(zhǒng)屬樣本，就必須選擇(zé)能檢(jiǎn)測該(gāi)種屬的抗體(tǐ)，因(yīn)為(wéi)抗體(tǐ)在(zài)不(bù)同種(zhǒng)屬(shǔ)間(jiān)存(cún)在差(chà)異。

四(sì)，宿主來(lái)源

宿(sù)主來源(yuán)，一般(bān)兔來源的(dí)多(duō)是(shì)多(duō)克隆(lóng)，也有兔單克(kè)隆；而(ér)小(xiǎo)鼠(shǔ)來源(yuán)的多是單克(kè)隆(lóng)。需要根據一抗宿(sù)主來(lái)源來選(xuǎn)擇相應(yīng)的二(èr)抗。

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