你(nǐ)知道細胞胞(bāo)內染(rǎn)色操(cāo)作流程是什(shí)麼(mó)嗎？讓我(wǒ)們一(yī)起來看(kàn)看吧！

一(yī)，細胞計(jì)數

將培(péi)養好的細胞收(shōu)集於15mL離(lí)心(xīn)管(guǎn)並(bìng)計數；500g離(lí)心4min，去(qù)上清(qīng)。

二，製備(bèi)單(dān)細(xì)胞懸液(yè)

將(jiāng)收(shōu)集(jí)的細胞(bāo)用1mL 0.5%BSA/PBS溶(róng)液重(zhòng)懸(xuán)，400g離心(xīn)3min，去上清，重復2次；用0.5%BSA/PBS溶(róng)液重(zhòng)懸(xuán)細(xì)胞至(zhì)濃度1x106個細(xì)胞(bāo)/mL，分配(pèi)到96孔板(bǎn)中，每孔(kǒng)100μl細胞懸液，400g離心5min去上清。

三，固定

每孔加入100μl細胞(bāo)固定劑(jì)重懸細(xì)胞，2-8°孵育20min。

四(sì)，洗(xǐ)滌(dí)

400g離心(xīn)5min，去上清後加(jiā)入200μl 0.5%BSA/PBS溶液(yè)重(zhòng)懸(xuán)，離(lí)心(xīn)去(qù)上清，重復兩遍(biàn)。

每孔加入100μl細胞通(tōng)透劑重懸(xuán)細(xì)胞(bāo)，室溫(wēn)孵(fū)育(yù)20min。

400g離心(xīn)5min，去(qù)上清後加(jiā)入(rù)200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸，離心去上清，重復(fù)兩(liǎng)遍。

五，阻斷Fc受體(tǐ)

10-20min。

六，一(yī)抗(kàng)孵育

每(měi)孔加(jiā)入稀釋後的一抗(kàng)溶液(yè)100μl，2-8℃反應30min。

七(qī)，洗滌(dí)

400g離(lí)心5min，去上(shàng)清後(hòu)加(jiā)入200μl 0.5%BSA/PBS溶(róng)液重懸，離(lí)心(xīn)去上(shàng)清，重復兩遍(biàn)。

八(bā)，二抗孵(fū)育

對於非熒光(guāng)染料直(zhí)標(biāo)抗體(tǐ)，加入100μl熒光二(èr)抗(kàng)重(zhòng)懸，避光(guāng)2-8℃反應30min。對(duì)於(yú)直(zhí)標抗體(tǐ)直(zhí)接跳(tiào)到(dào)步驟九(jiǔ)。

九，洗滌(dí)

400g離(lí)心5min，去上清(qīng)後加(jiā)入200μl 0.5%BSA/PBS溶(róng)液(yè)重(zhòng)懸，離(lí)心(xīn)去(qù)上清，重復(fù)兩遍(biàn)。

十(shí)，上機分析(xī)

用200μl 0.5%BSA/PBS溶(róng)液(yè)重(zhòng)懸細(xì)胞，4℃保(bǎo)存(cún)，上機分析。

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