免疫細(xì)胞化(huà)學 (ICC) 是一種使用熒(yíng)光(guāng)抗體或染料(liào)來(lái)檢測(cè)細胞(bāo)內(nèi)靶(bǎ)抗原(yuán)的(dí)技(jì)術。那麼(mó)你(nǐ)知道免疫細胞（ICC）實驗步驟(zhòu)有哪些嗎？讓我(wǒ)們(mén)一(yī)起來看看吧(bā)！

一(yī)，細胞培養/固定

很(hěn)多(duō)抗原在離(lí)體(tǐ)組織(zhī)中隻(zhī)存在很(hěn)短(duǎn)時間(jiān)，自溶（autolysis）和(hé)壞死(sǐ)（necrosis）使得(dé)抗原進一步(bù)降解，組(zǔ)織形態(tài)和(hé)結(jié)構被破(pò)壞(huài)。樣品(pǐn)浸(jìn)泡(pào)在(zài)合(hé)適的固定(dìng)液(yè)中，固定液完quan滲(shèn)透組(zǔ)織(zhī)，使蛋白失(shī)去(qù)活(huó)性(xìng)，並(bìng)且(qiě)使(shǐ)組織被(bèi)保存，穩定在接近 in vivo 狀態(tài)。

二，通(tōng)透處理

通透(tòu)即(jí)為(wéi)對(duì)細胞(bāo)膜進(jìn)行打孔處(chǔ)理(lǐ)，使抗體能進入到(dào)細(xì)胞中(zhōng)和(hé)抗原(yuán)發(fā)生(shēng)結(jié)合。通(tōng)常，當(dāng)抗體檢測細胞內蛋白時（包括抗原(yuán)表(biǎo)位(wèi)在(zài)胞內(nèi)段(duàn)的(dí)跨(kuà)膜(mó)蛋(dàn)白(bái)），需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行通透，一(yī)般將(jiāng)細(xì)胞樣(yàng)品在(zài)含 0.1-0.25% Triton X-100的PBS中(zhōng)孵育(yù)5-10分(fēn)鐘。

三(sān)，封(fēng)閉(bì)

對(duì)樣本(běn)進(jìn)行封閉，同樣是為了(liǎo)阻(zǔ)斷(duàn)抗(kàng)體抗(kàng)原之(zhī)間(jiān)的非特異(yì)結合(hé)，降(jiàng)低(dī)背景(jǐng)和潛(qián)在假陽(yáng)性(xìng)染色。

四(sì)，一抗孵育

ICC 實(shí)驗的成(chéng)功也(yě)依賴(lài)於(yú)靶(bǎ)標抗(kàng)原(yuán)特異性結合(hé)的(dí)一抗(kàng)。

五，二(èr)抗(kàng)孵(fū)育

對於間接檢測(cè)，二抗是成(chéng)功顯(xiǎn)示一(yī)抗分布的關(guān)鍵。使(shǐ)用二抗(kàng)和(hé)相關(guān)檢測係統(tǒng)能夠擴增(zēng)信(xìn)號，因(yīn)為不止(zhǐ)一個二抗分(fēn)子與(yǔ)單個(gè)一抗(kàng)結(jié)合。

化學顯色與熒光檢測：您可(kě)以選擇化學顯(xiǎn)色(sè)法，使用酶標(biāo)記的二抗，也(yě)可以(yǐ)選擇(zé)熒光法（免(miǎn)疫熒光(guāng)），使(shǐ)用(yòng)熒(yíng)光染(rǎn)料標記(jì)的(dí)二抗進(jìn)行檢測。

六，封片觀(guān)察(chá)

顯色完成後，通常(cháng)會對(duì)細胞(bāo)進(jìn)行(háng)復染(rǎn)，復染(rǎn)劑對特定的細胞(bāo)結(jié)構(gòu)進(jìn)行(háng)染(rǎn)色，增加染色對比效(xiào)果，明確細胞(bāo)或亞(yà)細(xì)胞(bāo)定(dìng)位。

復(fù)染(rǎn)試劑的(dí)選(xuǎn)擇取決(jué)於您(nín)對樣品的染(rǎn)色方式：顯(xiǎn)色(sè)劑(jì)（一(yī)種在(zài)標準光(guāng)學顯(xiǎn)微鏡下可見的染(rǎn)料(liào)）或(huò)熒(yíng)光染色(sè)。

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