免(miǎn)疫組織化(huà)學(immunohistochemistry，IHC)是(shì)一(yī)種綜(zōng)合定性，定(dìng)位和定(dìng)量；形態(tài)，機能和(hé)代謝(xiè)密切結合為一體的研(yán)究和(hé)檢(jiǎn)測技術(shù)。在原位(wèi)檢測出(chū)病原(yuán)的同(tóng)時，還(huán)能(néng)觀察到(dào)組織病變與該病原(yuán)的(dí)關係(xì)，確(què)認受(shòu)染細胞(bāo)類(lèi)型，從而(ér)有(yǒu)助於(yú)了(liǎo)解疾(jí)病的(dí)發(fā)病(bìng)機理和病(bìng)理過程。那(nà)麼(mó)你知道(dào)免(miǎn)疫組化實(shí)驗(yàn)常(cháng)見問題有哪些嗎(má)？讓我們一起(qǐ)來(lái)看看(kàn)吧
！

一，石蠟切片(piàn)再染(rǎn)色過程出(chū)現(xiàn)脫(tuō)片現(xiàn)象

1. 烤(kǎo)片(piàn)時間不(bù)夠(gòu)，或溫度不夠，可(kě)以延長烤(kǎo)片(piàn)時(shí)間和(hé)提高(gāo)烤片溫(wēn)度；

2. 用(yòng)含有(yǒu)多(duō)聚(jù)賴氨(ān)酸(suān)的玻片(piàn)，可以(yǐ)購買到(dào)或(huò)這自己(jǐ)做；

3. 有些(xiē)組(zǔ)織本(běn)身就容(róng)易掉(diào)片(piàn)，如(rú)骨(gǔ)組織(zhī)等(děng)，操(cāo)作時衝PBS不要(yào)直(zhí)接衝到組織上，衝到組織(zhī)上方(fāng)，讓它(tā)流(liú)下衝(chōng)洗組織(zhī)；

4. 用(yòng)高溫修復時(shí)，溫度(dù)驟冷也(yě)可能引起(qǐ)。

二，邊緣(yuán)效應

1. 組織邊緣與(yǔ)玻片(piàn)粘(nián)貼(tiē)不(bù)牢，邊緣組織(zhī)鬆脫漂浮(fú)在液(yè)體(tǐ)中(zhōng)，每次清洗(xǐ)不易將組(zǔ)織(zhī)下(xià)麵試(shì)劑洗盡所(suǒ)致(zhì). 解決辦法(fǎ)：製(zhì)備(bèi)優質的(dí)膠片(piàn)（APES或多聚(jù)賴(lài)氨(ān)酸），切出盡量(liáng)薄的(dí)組(zǔ)織切片(piàn)，不厚於(yú)4微(wēi)米，組織(zhī)的前期(qī)處(chǔ)理(lǐ)應規(guī)範，盡(jìn)量(liáng)避(bì)免選(xuǎn)用壞(huài)死(sǐ)較(jiào)多的(dí)組織；

2. 切(qiē)片(piàn)上滴加的試(shì)劑未充分覆(fù)蓋組織，邊緣(yuán)的(dí)試(shì)劑容易首先(xiān)變幹，濃度(dù)較中心(xīn)組織(zhī)高而致(zhì)染(rǎn)色深(shēn)。解決辦法：試劑要(yào)充分(fēn)覆(fù)蓋組(zǔ)織(zhī)，應超(chāo)出(chū)組(zǔ)織邊(biān)緣2mm。用組(zǔ)化筆畫(huà)圈時(shí)，為(wéi)了避(bì)免油(yóu)劑(jì)的(dí)影響，畫(huà)圈(quān)應距(jù)組織邊(biān)緣3-4mm。

三，產生組(zǔ)織(zhī)切片(piàn)非特(tè)異性染色(sè)

1. 抗體孵育時間過(guò)長，抗體(tǐ)濃度(dù)高易(yì)增(zēng)加背景著(zhuó)色。這(zhè)可通(tōng)過縮短一抗/二抗(kàng)孵(fū)育(yù)時間，稀釋抗(kàng)體來(lái)控製。這(zhè)是最(zuì)重要(yào)的一(yī)條；

2. 一抗用多(duō)克隆抗體(tǐ)易出(chū)現非特異性著色，建議(yì)試用單(dān)克隆抗體看(kàn)看(kàn)；

3. 內源性過氧化(huà)物(wù)酶(méi)和生(shēng)物(wù)素(sù)在(zài)肝髒，腎(shèn)髒等(děng)組織含量很高(gāo)（含血(xiě)細(xì)胞多的組織），需要通(tōng)過(guò)延長滅活時間和增加(jiā)滅活劑濃(nóng)度(dù)來降低(dī)背(bèi)景染色(sè)；

4. 非特異(yì)性(xìng)組分與抗體結合(hé)，這(zhè)需要(yào)通過(guò)延長二抗來源的動物(wù)免(miǎn)疫(yì)血(xiě)清(qīng)封(fēng)閉時間和(hé)適當增加濃(nóng)度來加強封(fēng)閉效(xiào)果；

5. DAB孵(fū)育(yù)時(shí)間(jiān)過(guò)長(cháng)或(huò)濃(nóng)度(dù)過高；

6. PBS衝洗(xǐ)不(bù)充分(fēn)，殘留抗體(tǐ)結果增(zēng)強(qiáng)著色(sè)，在一(yī)抗(kàng)，二(èr)抗(kàng)或(huò)SP孵育之(zhī)後(hòu)的(dí)浸(jìn)洗尤為(wéi)重要(yào)；

7. 標(biāo)本(běn)染色過程中經常出(chū)現幹片，這容(róng)易(yì)增強(qiáng)非特異性著(zhuó)色(sè)。

四(sì)，免疫(yì)組化染色(sè)呈陰(yīn)性結(jié)果

1. 抗(kàng)體(tǐ)濃度和(hé)質量問題(tí)以及(jí)抗體來源選擇錯誤(wù)；

2. 抗原(yuán)修復(fù)不全(quán)，對於甲醛固定的組(zǔ)織(zhī)必須(xū)用充(chōng)分抗(kàng)原修復來打(dǎ)開抗原表(biǎo)位(wèi)，以利(lì)於(yú)與(yǔ)抗(kàng)體結合；

3. 組(zǔ)織切片本身這(zhè)種抗原含量低；

4. 血清封(fēng)閉時間(jiān)過長；

5. DAB孵(fū)育時間過短；

6. 細(xì)胞(bāo)通透(tòu)不全，抗體未(wèi)能充(chōng)分進(jìn)入胞(bāo)內參(cān)與反(fǎn)應；

7. 開始做免疫(yì)組化，我(wǒ)建(jiàn)議你(nǐ)一定(dìng)要(yào)首先做(zuò)個(gè)陽(yáng)性對照片(piàn)，排除(chú)抗體等(děng)外的(dí)方法(fǎ)問(wèn)題。

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