你(nǐ)知(zhī)道(dào)該如何配置培(péi)養(yǎng)基嗎？讓我們一起來看看吧(bā)！

一(yī)，細(xì)胞實驗(yàn)全(quán)程(chéng)注(zhù)意(yì)事項(xiàng)

1.無菌操作(zuò)是重中(zhōng)之重(zhòng)，細(xì)胞培(péi)養(yǎng)對(duì)無(wú)菌條件(jiàn)比(bǐ)較苛刻，實驗人在進(jìn)行(háng)整個細(xì)胞(bāo)實驗(yàn)的無(wú)菌(jūn)意(yì)識(shí)一定要(yào)強，否則(zé)一個(gè)不(bù)小心，發(fā)生(shēng)細(xì)菌汙染，輕(qīng)則浪費細胞，重則汙(wū)染(rǎn)整(zhěng)個培(péi)養箱(xiāng)。

2.實(shí)驗人員進(jìn)入(rù)細胞房前應該換(huàn)上幹淨(jìng)的鞋(xié)子(zǐ)，白大褂，手套(tào)和(hé)口罩。

3.所有耗材放入工(gōng)作台(tái)前(qián)都(dū)需用75%酒精進行消毒(dú)，雙手(shǒu)進入工(gōng)作(zuò)台前(qián)也(yě)需要用(yòng)75%的酒精進(jìn)行消(xiāo)毒(dú)。

4.進(jìn)行(háng)實(shí)驗(yàn)前(qián)應先對(duì)工作台(tái)進行(háng)紫(zǐ)外(wài)滅(miè)菌30min以(yǐ)上，並將(jiāng)所有需要用到的(dí)耗材放到工作(zuò)台上一(yī)起(qǐ)進(jìn)行(háng)紫(zǐ)外(wài)滅菌（簡(jiǎn)稱(chēng)照台(tái)）。

5.使用(yòng)酒(jiǔ)精(jīng)燈的實驗室需(xū)要特別注意安全，剛噴(pēn)灑(sǎ)完(wán)酒精的(dí)物品不要(yào)靠近(jìn)酒(jiǔ)精燈(dēng)，有(yǒu)生物(wù)安(ān)全(quán)櫃的實(shí)驗室(shì)則(zé)不(bù)需要使用(yòng)酒(jiǔ)精燈。

6.進行(háng)實驗前應先(xiān)用酒精棉擦拭(shì)工作(zuò)台，所(suǒ)有(yǒu)操(cāo)作都(dū)應在靠近酒精(jīng)燈(dēng)火焰下方(fāng)進行（有(yǒu)生物安(ān)全櫃的(dí)則(zé)不(bù)需(xū)要使用(yòng)酒精燈）。

7.實驗結束後應及時將(jiāng)垃(lā)圾(jī)處理(lǐ)，再用(yòng)酒精棉擦(cā)拭工作(zuò)台，對(duì)工(gōng)作台進行紫外滅菌30min以(yǐ)上。

二(èr)，配(pèi)製(zhì)基(jī)礎培養(yǎng)基

1. 準備(bèi)材料(liào)：

50mL離心管(guǎn)，封口(kǒu)膜(mó)，鑷子(zǐ)，移液槍(qiāng)，DMEM培養液(yè)，雙抗，胎(tāi)牛血(xiě)清等(děng)。

2. 操作(zuò)步(bù)驟(zhòu)：

（1）用移(yí)液(yè)槍吸取44mL的DMEM培養(yǎng)液，轉移至(zhì)離心管中。注(zhù)意(yì)槍頭不要碰到(dào)培養液(yè)瓶口。

（2）用(yòng)移液(yè)槍(qiāng)吸(xī)取1mL的雙(shuāng)抗，轉(zhuǎn)移至離心管(guǎn)中(zhōng)，吹(chuī)打混匀。

（3）用(yòng)移(yí)液槍(qiāng)吸(xī)取5mL的胎(tāi)牛血清(qīng)，轉移至離心管中，吹(chuī)打混(hùn)匀(yún)。

（4）用封口(kǒu)膜將離心管封口(kǒu)，置於4℃保存。

（5） 雙抗，胎牛血(xiě)清置於-20℃長期保(bǎo)存(cún)，置(zhì)於4℃短(duǎn)期(qī)保(bǎo)存。

（6）DMEM培養(yǎng)液(yè)置(zhì)於4℃保(bǎo)存(cún)。

3. 注(zhù)意(yì)事項：

（1）配製(zhì)好(hǎo)的培養(yǎng)基盡(jìn)快使(shǐ)用，一般(bān)可存放三個月(yuè)左(zuǒ)右，放置(zhì)久了裏麵(miàn)的(dí)物質可能(néng)會失活(huó)，培(péi)養(yǎng)出來的細胞(bāo)狀(zhuàng)態就不這麼好了。

（2）使(shǐ)用移液槍(qiāng)時，注意槍頭(tóu)不要碰到任何東(dōng)西(xī)，如果碰到了(liǎo)，不要(yào)猶(yóu)豫馬上(shàng)丟棄。

（3）雙抗，胎(tāi)牛(niú)血清應避(bì)免反復凍(dòng)融(róng)，可根(gēn)據(jù)需(xū)要將其分裝(zhuāng)保(bǎo)存。

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