質(zhì)粒轉染的(dí)操作步(bù)驟
 

　　轉染(rǎn)(transfection)是(shì)細胞(bāo)在一定(dìng)條(tiáo)件(jiàn)下(xià)主動或被動(dòng)導(dǎo)入(rù)外源(yuán)DNA片段而獲得新的(dí)表型(xíng)的過程(chéng)。質粒(lì)轉染(rǎn)對(duì)於哺乳(rǔ)細(xì)胞(bāo)蛋白的(dí)表(biǎo)達(dá)至關(guān)重要(yào)，轉染的方(fāng)法和(hé)步(bù)驟直(zhí)接影響著轉(zhuǎn)染(rǎn)的(dí)成(chéng)功(gōng)與否(fǒu)。那(nà)麼你(nǐ)知(zhī)道(dào)質粒(lì)轉(zhuǎn)染(rǎn)的(dí)操作步驟有(yǒu)那(nà)些嗎？讓我們(mén)一(yī)起來看看(kàn)吧！
 

　　以24孔板(bǎn)培養的哺(bǔ)乳動物(wù)細(xì)胞為(wéi)例
：
 

　　一，種細胞(bāo)；
 

　　1. 貼壁(bì)細(xì)胞(bāo)
：轉(zhuǎn)染前(qián)一(yī)天(tiān)每孔0.5-2×10E5個細胞(bāo)接(jiē)種於500ul培(péi)養(yǎng)基中，在轉(zhuǎn)染(rǎn)時細胞(bāo)可(kě)長至(zhì)90-95%匯(huì)合(hé)度(dù)。
 

　　2. 懸(xuán)浮(fú)細胞
：在(zài)配(pèi)置轉(zhuǎn)染(rǎn)液前(qián)每孔4-8×10E5個細胞(bāo)接種於(yú)500ul培(péi)養基(jī)中。
 

　　二，轉(zhuǎn)染液(yè)配置，每(měi)孔細(xì)胞用量(liáng)如下
：
 

　　1. 用50ul無血(xiě)清(qīng)培養(yǎng)基稀釋質(zhì)粒DNA，輕輕(qīng)混匀。
 

　　2. 取(qǔ)適量合適(shì)的(dí)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑在(zài)50ul無血(xiě)清培(péi)養基中稀釋，室(shì)溫孵(fū)育(yù)5min。
 

　　3. 將前(qián)兩步所稀釋的(dí)DNA和(hé)質粒(lì)轉染試劑(jì)混合，輕輕混匀，室溫(wēn)放(fàng)置(zhì)30min。
 

　　三，在每(měi)孔細胞(bāo)中加(jiā)入混合後的轉(zhuǎn)染(rǎn)液，輕輕(qīng)搖匀。
 

　　四，貼壁細胞可在(zài)轉(zhuǎn)染4-6h後(hòu)更(gēng)換(huàn)培養基，懸浮細胞可在轉(zhuǎn)染後18-48h間進行(háng)細胞(bāo)換(huàn)液(yè)，轉(zhuǎn)染(rǎn)18-48h後可檢測基(jī)因(yīn)mRNA水(shuǐ)平(píng)表達。如(rú)果檢(jiǎn)測蛋白(bái)表達(dá)，需(xū)在轉染後(hòu)48-72h收集細(xì)胞(bāo)樣(yàng)品。
 

　　五(wǔ)，對(duì)於穩(wěn)定轉染(rǎn)，在轉染24h後以(yǐ)1:10傳(chuán)代(dài)培(péi)養，第(dì)二天可(kě)加入選(xuǎn)擇培養基(jī)。
 

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