外(wài)泌體是(shì)一種細胞分泌的(dí)微(wēi)小膜泡(pào)，大小(xiǎo)為30~150nm的磷(lín)脂(zhī)雙分子(zǐ)結(jié)構(gòu)，可在細(xì)胞間(jiān)傳(chuán)遞物(wù)質(zhì)和信號(hào)。它(tā)在(zài)機(jī)體內廣泛(fàn)存(cún)在，如(rú)外(wài)周(zhōu)血(xiě)，腹(fù)水，尿液，唾(tuò)液，腦脊液等各(gè)種體(tǐ)液中。那麼(mó)你(nǐ)知道(dào)外(wài)泌體提取與純化(huà)常見方(fāng)法有哪些(xiē)嗎(má)？讓我們一(yī)起來(lái)看看吧(bā)！

一，差(chà)速離心法

差速(sù)離(lí)心法(fǎ)是(shì)最常(cháng)見(jiàn)的外(wài)泌體分(fēn)離(lí)技術之一。這種(zhǒng)方法(fǎ)利用(yòng)外泌(mì)體(tǐ)與(yǔ)其(qí)他(tā)細(xì)胞器(qì)的沉(chén)降(jiàng)係(xì)數不同(tóng)，將(jiāng)細胞(bāo)，細(xì)胞碎片(piàn)以(yǐ)及(jí)其他(tā)細胞器等，通(tōng)過不同離心速度(dù)分離(lí)出去，從而得到純(chún)淨(jìng)的外泌體。

該(gāi)方(fāng)法的(dí)優點(diǎn)在於(yú)提(tí)取(qǔ)方法簡單(dān)，提取(qǔ)過程(chéng)中(zhōng)不會引入(rù)其他的標(biāo)記(jì)物(wù)，適合(hé)大(dà)劑量的(dí)樣品處(chǔ)理(lǐ)。

缺(quē)點(diǎn)在(zài)於操(cāo)作繁(fán)瑣，費時費(fèi)力，操(cāo)作(zuò)過程(chéng)中需要超高速(sù)離心(xīn)，且由於(yú)離心力(lì)的(dí)因(yīn)素(sù)，可能會(huì)導致外泌(mì)體結構(gòu)破(pò)壞(huài)從而對(duì)下(xià)遊(yóu)實驗造(zào)成影(yǐng)響(xiǎng)，對(duì)於一些具有高粘(nián)度(dù)的(dí)生物(wù)樣品（例如血漿(jiāng)和(hé)血清樣本），則(zé)需要更長(cháng)的超(chāo)速離心步驟(zhòu)和更(gēng)高的離(lí)心速度。

二(èr)，密(mì)度梯(tī)度離(lí)心法

該方(fāng)法(fǎ)將超(chāo)速(sù)離心與蔗(zhè)糖密度(dù)梯度(dù)相(xiāng)結合(hé)，利(lì)用外泌體1.13g/ml-1.21g/ml的(dí)密(mì)度(dù)範圍(wéi)，實現外(wài)泌體與(yǔ)非囊泡顆粒（如(rú)蛋白質(zhì)，蛋白質/RNA聚集體(tǐ)等）進行分離，從而能(néng)夠(gòu)提取含量低(dī)的外泌(mì)體。

2018年Li K等人改良了此方(fāng)案，使用碘(diǎn)克沙醇(chún)作(zuò)為新的一種(zhǒng)高(gāo)效介質(zhì)，外泌(mì)體(tǐ)回收率更高，純(chún)度(dù)更高(gāo)，並且結構(gòu)和功(gōng)能(néng)保持更好。

三(sān)，聚合物(wù)沉降(jiàng)法(fǎ)

這種(zhǒng)方法是通過高分子的(dí)疏水聚(jù)合(hé)物(wù)（如聚(jù)乙(yǐ)二醇(chún)（PEG））可以改(gǎi)變外泌(mì)體(tǐ)溶(róng)解性和分散性的(dí)特點，使(shǐ)其能夠(gòu)在比較低的(dí)離心力(lì)下(xià)沉降出(chū)來(lái)。其(qí)原理(lǐ)可能與(yǔ)疏(shū)水聚合(hé)物(wù)競(jìng)爭性結合(hé)遊(yóu)離(lí)水(shuǐ)分(fēn)子(zǐ)以及(jí)疏水聚(jù)合物(wù)本身形成(chéng)的(dí)網狀結構有(yǒu)關(guān)。

聚合(hé)物沉降法的優點在(zài)於操作(zuò)起(qǐ)來較為簡單，不需(xū)要(yào)超速離(lí)心機(jī)，得到的(dí)外(wài)泌體數(shù)量較多，對外泌(mì)體(tǐ)理化性(xìng)質影(yǐng)響(xiǎng)較小(xiǎo)。

然(rán)而基於聚合物的(dí)沉澱(diàn)方(fāng)法可(kě)能(néng)會同時分(fēn)離非(fēi)囊泡汙(wū)染物（如脂(zhī)蛋(dàn)白等），從而對(duì)下遊(yóu)分析造成一定(dìng)影響。

四，超濾法(fǎ)

這(zhè)種方法是(shì)將溶(róng)劑及小分子(zǐ)物質過濾(lǜ)到(dào)膜(mó)的(dí)另一側(cè)，而將相對大分(fēn)子(zǐ)物質(zhì)截留(liú)在超濾(lǜ)膜上，以達到(dào)分離(lí)的目(mù)的(dí)。外(wài)泌(mì)體直徑範圍30～150 nm，利(lì)用超濾膜(mó)經過(guò)長時間(jiān)的低速(sù)離心就可以分(fēn)離樣本(běn)中的外泌(mì)體。

超(chāo)濾(lǜ)法的(dí)優點是操作(zuò)方(fāng)便，富(fù)集(jí)效率比(bǐ)較高(gāo)，易於搭配其他膜或(huò)操作，並且成本較低。

缺點在(zài)於(yú)過膜易損耗(hào)變形(xíng)，導(dǎo)致(zhì)膜堵塞，純度較(jiào)低，大顆粒(lì)蛋白汙染(rǎn)嚴(yán)重(zhòng)，並且在洗脫(tuō)過(guò)程中，附著於膜上的外(wài)泌體(tǐ)難(nán)以回收，導致提取(qǔ)損(sǔn)失(shī)。

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