在基(jī)因表達調控的研(yán)究(jiū)中(zhōng)
，報(bào)告基因廣泛(fàn)應用
，如熒光蛋白(bái)，真(zhēn)核抗(kàng)性和熒(yíng)光(guāng)素酶(méi)等。在(zài)一(yī)些(xiē)臨(lín)床醫學(xué)或基(jī)礎醫學(xué)文(wén)章(zhāng)中(zhōng)
，雙熒(yíng)光素酶結合驗證實(shí)驗(yàn)部(bù)分(fēn)是(shì)多(duō)數(shù)機製(zhì)研究(jiū)bi備的(dí)實驗部分
，例如(rú)：在通(tōng)路研究中
，尤其涉(shè)及到(dào)miRNA與(yǔ)功(gōng)能(néng)基(jī)因(yīn)的相(xiāng)互作(zuò)用時
，雙(shuāng)螢光素(sù)酶(méi)報告基因檢(jiǎn)測實(shí)驗是(shì)bi備的(dí)實驗(yàn)要(yào)點。那麼(mó)你知道到底(dǐ)什麼是(shì)雙(shuāng)熒(yíng)光(guāng)素酶(méi)實驗(yàn)嗎？讓(ràng)我(wǒ)們一起來(lái)看(kàn)看(kàn)吧！

螢(yíng)光(guāng)素酶（Luciferase）是(shì)自然界(jiè)中能夠產生(shēng)生物螢光(guāng)的酶的總稱(chēng)
，其(qí)中(zhōng)應用較(jiào)為(wéi)廣(guǎng)泛(fàn)的(dí)是螢火蟲螢光素(sù)酶（Firefly luciferase）和海腎(shèn)螢(yíng)光素(sù)酶(méi)（Renilla luciferase）。

螢(yíng)火(huǒ)蟲(chóng)螢(yíng)光素酶(méi)可(kě)以(yǐ)催化(huà)螢(yíng)光素氧(yǎng)化成oxyluciferin
，在(zài)螢光(guāng)素氧化的過程中
，會發出生物(wù)螢(yíng)光
，呈(chéng)現(xiàn)黃(huáng)綠(lǜ)色(sè)
，海(hǎi)腎(shèn)螢(yíng)光素酶可(kě)以催化(huà)腔腸(cháng)素氧(yǎng)化(huà)成coelenteramide
，在(zài)腔腸素氧化的過程中(zhōng)
，會(huì)發出(chū)生物(wù)螢(yíng)光
，呈現(xiàn)藍光
，通過酶(méi)標(biāo)儀(yí)即可測(cè)定所發出(chū)的(dí)生(shēng)物螢光。

雙螢(yíng)光素酶報(bào)告基(jī)因(yīn)通常以(yǐ)螢(yíng)火(huǒ)蟲(chóng)螢光素酶為(wéi)報告基因
，以海(hǎi)腎螢光(guāng)素(sù)酶為內(nèi)參基因
，如此(cǐ)所構(gòu)成(chéng)的報(bào)告(gào)係統有檢(jiǎn)測靈敏度高(gāo)，動(dòng)態(tài)範圍廣，內參平(píng)衡(héng)等(děng)優勢(shì)
，因此(cǐ)在(zài)實(shí)驗中得到廣(guǎng)泛應(yīng)用(yòng)。

常(cháng)見(jiàn)應(yīng)用(yòng)方向：

1. 驗(yàn)證(zhèng)miRNA同mRNA靶向(xiàng)互作(zuò)。將靶mRNA的3’UTR序列插入報告基因載體(tǐ)
，再共轉(zhuǎn)入(rù)該miRNA
，檢(jiǎn)測螢光素(sù)酶(méi)活性(xìng)。

2. 驗(yàn)證(zhèng)miRNA同(tóng)circRNA靶(bǎ)向(xiàng)互(hù)作(zuò)。將circRNA序列(liè)插(chā)入報告(gào)基(jī)因載體中(zhōng)F-Luc的3’UTR區(qū)域(yù)
，檢(jiǎn)測螢光素酶活性。

3. 驗證miRNA同IncRNA靶(bǎ)向(xiàng)互作(zuò)。將(jiāng)IncRNA序(xù)列插入報告基(jī)因載(zǎi)體(tǐ)中F-Luc的3’UTR區域
，檢(jiǎn)測螢光(guāng)素酶活性。

4. 啟(qǐ)動(dòng)子(zǐ)活(huó)性分(fēn)析。

將啟動子區域序列進行分段截短(duǎn)
，再分別構建(jiàn)入報告基(jī)因載體(tǐ)
，檢(jiǎn)測(cè)其(qí)啟(qǐ)動(dòng)子活(huó)性(xìng)。

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