Western blot是(shì)一個非常基礎(chǔ)的實驗，但是(shì)著(zhuó)實(shí)讓我們(mén)頭(tóu)疼，即使是老手也擋不(bù)住(zhù)WB實驗的千(qiān)錘百(bǎi)煉，懂得都懂，當WB實驗中出(chū)現不同情(qíng)況的條(tiáo)帶(dài)問題(tí)怎(zěn)麼解決(jué)呢？我(wǒ)們(mén)一起(qǐ)來探討一下，希望對正在做(zuò)WB實驗(yàn)的(dí)小夥(huǒ)伴(bàn)提供(gōng)一個避雷參(cān)考！

情況(kuàng)一(yī)：條帶呈笑臉(liǎn)狀

1.遷(qiān)移過快或電(diàn)泳溫(wēn)度過高(gāo)：降(jiàng)低(dī)電壓或(huò)低(dī)溫電泳。

2.配膠問(wèn)題(tí)，凝膠不均(jūn)匀冷卻，中間冷(lěng)卻(què)不(bù)好遷(qiān)移過(guò)快：重(zhòng)新(xīn)配膠(jiāo)，電(diàn)泳(yǒng)槽(cáo)老化換新(xīn)。

情況(kuàng)二：條(tiáo)帶呈(chéng)皺眉(méi)狀

配(pèi)膠問(wèn)題，可(kě)能是(shì)裝置不合(hé)適特別可能(néng)是凝膠和玻璃(lí)擋板底部有氣(qì)泡(pào)或者凝膠(jiāo)兩(liǎng)邊聚合(hé)不(bù)wan全。

情況三(sān)：條(tiáo)帶(dài)彌散或(huò)拖(tuō)尾

1. 蛋白上(shàng)樣量過多：降(jiàng)低(dī)上樣(yàng)量。

2. 電(diàn)泳結束後未立即轉(zhuǎn)膜(mó)：電(diàn)泳後盡(jìn)快轉(zhuǎn)膜(mó)。

3. 蛋白降解(jiě)：加(jiā)入蛋白酶抑製劑。

4.樣品核酸汙(wū)染(rǎn)：可進行超(chāo)聲(shēng)及核酸(suān)酶(méi)處(chǔ)理(lǐ)或樣品(pǐn)有不(bù)溶(róng)物，可(kě)稀(xī)釋，充分(fēn)裂(liè)解(jiě)或離心(xīn)操作。

情(qíng)況(kuàng)四:條帶(dài)偏斜

電極(jí)不(bù)平(píng)衡或者加(jiā)樣(yàng)位(wèi)置(zhì)偏(piān)斜。

情況(kuàng)五：條(tiáo)帶向(xiàng)兩(liǎng)邊擴(kuò)散(sàn)，不(bù)完(wán)整

1.抗體(tǐ)孵育(yù)不均一(yī)，或(huò)未充(chōng)分結(jié)合(hé)：增(zēng)加抗體孵育時間，建(jiàn)議(yì)4℃過夜孵育(yù)。

2.抗體濃(nóng)度(dù)偏(piān)低：使用高(gāo)濃度抗體(tǐ)。

3.化學(xué)發光液未加均一(yī)：適當(dāng)增(zēng)加化學發(fā)光(guāng)液的量。

4.反(fǎn)應時(shí)間(jiān)不(bù)夠：增(zēng)加化(huà)學(xué)發(fā)光顯色反(fǎn)應的時間。

情況六：條帶空心

可能(néng)由(yóu)於蛋(dàn)白(bái)濃度(dù)過高導致(zhì)的(dí)底物消耗完畢(bì)，建議稀釋(shì)樣本濃(nóng)度(dù)。

情況七：條帶(dài)有不均(jūn)匀(yún)的汙點(diǎn)

1.膜(mó)上有氣(qì)泡(pào)：轉膜(mó)時將PVDF膜慢慢(màn)貼(tiē)膠(jiāo)上(shàng)後(hòu)，可(kě)以(yǐ)用(yòng)玻璃棒輕輕滾動，以驅(qū)趕(gǎn)膜與澆之間的氣泡。

2.設(shè)備(bèi)汙(wū)染：確保(bǎo)設備清(qīng)洗幹淨。

3.孵(fū)育(yù)或洗(xǐ)滌(dí)溶液(yè)不(bù)足，確(què)保孵(fū)育洗滌(dí)充分(fēn)。

4.封(fēng)閉液未(wèi)混(hùn)匀，確(què)保(bǎo)混匀(yún)，使(shǐ)用(yòng)新鮮的(dí)封閉液，避(bì)免(miǎn)顆(kē)粒(lì)不(bù)溶物(wù)。

5.膜被(bèi)汙染：實驗操(cāo)作人員(yuán)戴(dài)手套(tào)和口罩，穿實驗服，保持膜的幹(gān)淨。禁止(zhǐ)用手直(zhí)接(jiē)觸摸(mō)膜。

情(qíng)況八(bā)：深(shēn)背景出(chū)現白(bái)色(sè)反(fǎn)光(guāng)條(tiáo)帶

中心部(bù)位高濃度 HRP 將底物(wù)消耗過(guò)快，中間部位(wèi)底物(wù)消耗完後無法(fǎ)發光。

1.蛋白上樣量過多(duō)：降低(dī)蛋(dàn)白(bái)上樣量。

2.一抗(kàng)二(èr)抗濃度過高(gāo)：適當(dāng)加大抗(kàng)體(tǐ)稀釋。

情(qíng)況九：啞鈴(líng)型條(tiáo)帶(dài)

1. 配(pèi)膠(jiāo)問題(tí)，可能(néng)拔膠(jiāo)時用力過猛，導(dǎo)致(zhì)膠(jiāo)變形(xíng)突起：重(zhòng)新(xīn)配(pèi)膠。

2. 蛋白質(zhì)有雜質(zhì)。

情況十(shí)：出(chū)現非均一性(xìng)背景，髒(zàng)亂

膜(mó)可(kě)能曾經(jīng)幹(gān)過：可在實(shí)驗過程中(zhōng)要(yào)保證膜一直(zhí)處於濕潤狀(zhuàng)態(tài)。

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