Elabscience Annexin V-FITC/DAPI熒光(guāng)雙染細胞(bāo)凋亡檢測(cè)試劑盒(hé)現貨供應

Elabscience®自主研發的(dí)Annexin V-FITC/DAPI Apoptosis Kit
，可用於(yú)檢(jiǎn)測懸浮細胞和貼壁(bì)細(xì)胞的(dí)凋(diāo)亡。 Annexin V是一(yī)種(zhǒng)鈣離(lí)子(zǐ)依(yī)賴性(xìng)磷脂(zhī)結合(hé)蛋(dàn)白
，與磷脂酰絲(sī)氨(ān)酸 (PS)有高度(dù)親(qīn)和(hé)力(lì)。當細(xì)胞發生凋亡時
，膜內(nèi)側的(dí)磷脂(zhī)酰絲(sī)氨(ān)酸(suān) (PS) 外翻到膜表麵(miàn)
，而被熒(yíng)光染(rǎn)料FITC標記的(dí)Annexin V結(jié)合
，可通過(guò)流(liú)式細(xì)胞儀(yí)或熒(yíng)光顯微鏡(jìng)進行檢測。由於凋(diāo)亡(wáng)晚期(qī)或(huò)壞(huài)死(sǐ)細胞(bāo)膜喪失完整(zhěng)性
，而4',6-二(èr)脒基-2-苯基吲哚二yan酸鹽(yán)（4',6-Diamidino-2- Phenylindole, DAPI）可與雙(shuāng)鏈(liàn) DNA 特(tè)異性(xìng)結(jié)合(hé)並(bìng)產生強烈(liè)的(dí)熒光(guāng)
，與Annexin V搭(dā)配使用
，可(kě)區分(fēn)處於(yú)不(bù)同凋亡(wáng)時(shí)期的細胞。本(běn)試劑盒(hé)檢測喜樹(shù)鹼(jiǎn)誘(yòu)導的 Jurkat 細胞凋(diāo)亡(wáng)效(xiào)果(guǒ)如(rú)下圖(tú)所(suǒ)示(shì)：

實(shí)驗操作(zuò)：

一(yī)步法

1．細(xì)胞(bāo)按照實驗方案(àn)進(jìn)行(háng)凋亡誘導
，300×g離心5min
，棄上清(qīng)
，收(shōu)集細胞
，PBS 洗滌一次
，輕輕重懸細(xì)胞並(bìng)計(jì)數(shù)。

2．取1~5×105重(zhòng)懸的(dí)細胞(bāo)
，300×g離(lí)心(xīn)5 min
，棄上清(qīng)。用(yòng)PBS洗滌細(xì)胞一(yī)次
，離(lí)心後棄上(shàng)清
，加(jiā)入500μL稀(xī)釋(shì)的(dí)1×Annexin V Binding Buffer重懸細胞。

3．細(xì)胞懸液中(zhōng)加入5μL的Annexin V-FITC Reagent和(hé)5μL的(dí)DAPI Reagent (25μg/mL)。

4．輕柔(róu)渦旋混(hùn)匀(yún)後(hòu)
，室(shì)溫避(bì)光(guāng)孵(fū)育(yù)15~20 min。

5．立(lì)即上機檢(jiǎn)測。如不能(néng)及時檢測
，請於冰(bīng)上(shàng)避光(guāng)靜(jìng)置並(bìng)於(yú)1小(xiǎo)時內完(wán)成檢(jiǎn)測(cè)。

注：流式細胞(bāo)儀檢(jiǎn)測時(shí)Annexin V-FITC可用FITC通道(dào)
，DAPI優(yōu)先選DAPI 通(tōng)道
，其次(cì)是Pacific Blue通(tōng)道。

兩步法

1．細胞按照實(shí)驗(yàn)方案(àn)進行(háng)凋亡(wáng)誘導
，300 ×g 離(lí)心 5 min
，棄(qì)上清(qīng)
，收(shōu)集(jí)細(xì)胞(bāo)
，PBS 洗(xǐ)滌一(yī)次
，輕(qīng)輕(qīng)重

懸細胞並計(jì)數。

2．取(qǔ)1~5×105重懸的細胞
，300×g離心5 min
，棄(qì)上清。用PBS洗滌細(xì)胞一次
，離心後棄上清(qīng)
，加

入(rù)100μL稀釋的(dí) 1×Annexin V Binding Buffer重懸細(xì)胞(bāo)。

3．細胞(bāo)懸液中加入2.5μL的Annexin V-FITC Reagent和(hé)2.5μL的DAPI Reagent (25μg/mL)。（由於兩(liǎng)步法(fǎ)分辨(biàn)率(shuài)更高(gāo)
，染(rǎn)色液用(yòng)量(liáng)減半依(yī)然可(kě)得到(dào)媲(pì)美一步(bù)法(fǎ)的(dí)效(xiào)果；用(yòng)戶亦可(kě)根據自己的模(mó)型進行滴(dī)定後加(jiā)入適量的(dí)染色(sè)液
，用更少的(dí)量獲得(dé)高質量(liáng)的(dí)結果。）

4．輕柔渦旋(xuán)混(hùn)匀後(hòu)
，室溫避(bì)光(guāng)孵(fū)育 15~20 min。

5．加入(rù) 400 μL 稀釋的 1 × Annexin V Binding Buffer
，混(hùn)匀樣(yàng)本。

6．立即上機(jī)檢(jiǎn)測(cè)。如不(bù)能及時檢測
，請於(yú)冰上(shàng)避(bì)光(guāng)靜置並於(yú) 1 小時(shí)內完(wán)成(chéng)檢測(cè)。

注：流(liú)式(shì)細(xì)胞(bāo)儀檢(jiǎn)測時 Annexin V-FITC可(kě)用(yòng)FITC通(tōng)道
，DAPI 優先選 DAPI 通道(dào)
，其(qí)次是(shì) Pacific Blue 通(tōng)道。

產(chǎn)品(pǐn)選(xuǎn)購(gòu)：