ElabscienceL-乳酸(suān)(LA)比色法測(cè)試(shì)盒適(shì)用於檢(jiǎn)測(cè)血(xiě)清(qīng)（漿），細胞(bāo)上(shàng)清，組織(zhī)，細胞(bāo)等樣本中(zhōng)乳酸的(dí)含(hán)量。以氧化(huà)型輔(fǔ)酶Ⅰ（NAD+）為氫受體，乳酸脫氫(qīng)酶（LDH）催化乳(rǔ)酸脫(tuō)氫(qīng)產生(shēng)丙(bǐng)酮酸，使 NAD+轉化(huà)為(wéi)還(huán)原型輔酶(méi)Ⅰ（NADH）。其中(zhōng) N-甲基吩(fēn)嗪甲(jiǎ)基硫酸(suān)鹽（PMS）遞(dì)氫(qīng)使氯化(huà)硝基四(sì)氮唑藍（NBT）還(huán)原(yuán)為(wéi)紫色(sè)呈色物(wù)，呈色(sè)物(wù)的(dí)吸光度(dù)在 530 nm 時與乳酸(suān)含(hán)量呈(chéng)綫(xiàn)性關係(xì)。本試劑盒檢測組織(zhī)和細胞(bāo)樣本時，需測定總蛋白濃(nóng)度，推薦(jiàn)使用 BCA 法

樣(yàng)本準備：

① 樣本(běn)處(chǔ)理(lǐ)

血清血漿(jiāng)等液(yè)體(tǐ)樣本：可直接(jiē)測(cè)定(dìng)。

組(zǔ)織(zhī)樣(yàng)本(běn)：常(cháng)規匀(yún)漿(jiāng)處理(lǐ)(生(shēng)理鹽(yán)水(0.9% NaCl 溶(róng)液)或 PBS(0.01 M，pH 7.4)。匀漿後，4℃，10000×g離心(xīn)10 min，取上(shàng)清(qīng)置於(yú)冰上待測(cè)。留取(qǔ)部(bù)分上清(qīng)用於蛋白濃度測定(dìng)。

細(xì)胞樣本：取(qǔ)106細胞加(jiā)入(rù)300μL生(shēng)理鹽(yán)水(shuǐ)(0.9% NaCl溶液(yè))或PBS(0.01 M，pH 7.4)進行匀(yún)漿(jiāng)。匀漿後，4℃，10000×g離(lí)心10 min，取上(shàng)清(qīng)置(zhì)於冰(bīng)上(shàng)待測(cè)。留(liú)取(qǔ)部(bù)分(fēn)上清用(yòng)於蛋白濃(nóng)度測定。

② 樣(yàng)本(běn)的稀釋

在正式(shì)檢(jiǎn)測前，需選(xuǎn)擇2-3個(gè)預期差(chà)異(yì)大的樣本(běn)稀釋(shì)成不同濃度(dù)進行預實驗(yàn)，根據預實(shí)驗(yàn)的(dí)結果(guǒ)，結合本試劑盒的綫性(xìng)範圍：0.12-7.0 mmol/L。

操(cāo)作步驟(zhòu)：

① 標(biāo)準孔：取5μL不同(tóng)濃(nóng)度(dù)標準品(pǐn)，加入到對(duì)應的(dí)標準孔(kǒng)中(zhōng)；

樣(yàng)本(běn)孔：取(qǔ)5μL待測(cè)樣(yàng)本，加(jiā)入(rù)到(dào)樣本(běn)孔(kǒng)中(zhōng)。

② 向①中(zhōng)各(gè)孔加入(rù)100μL酶工(gōng)作液。

③ 向(xiàng)②中各孔加(jiā)入20μL試劑(jì)三(sān)。

④ 37℃條(tiáo)件下孵(fū)育10 min。

⑤ 向標準(zhǔn)，測定(dìng)各孔中加入180μL 試劑四。

⑥ 酶標儀上振蕩 5 s，酶標(biāo)儀530 nm處，測定(dìng)各孔OD值。

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