Elabscience甲(jiǎ)酸(suān)鹽比色法(fǎ)測試(shì)盒適用於(yú)檢(jiǎn)測(cè)動物(wù)組(zǔ)織樣本(běn)及血(xiě)清(qīng)(漿(jiāng))等(děng)液(yè)體(tǐ)樣本中甲(jiǎ)酸鹽(yán)的(dí)含量(liáng)。

甲酸脫(tuō)氫酶(FDH)能(néng)夠(gòu)催(cuī)化(huà)甲酸和(hé) NAD+反應(yīng)產(chǎn)生(shēng) NADH，NADH在PMS作用下，將電子傳(chuán)遞給(gěi) WST-8，生產(chǎn)黃色(sè)的產(chǎn)物，其(qí)在(zài)450 nm處(chǔ)有特征(zhēng)吸(xī)收峰。樣本(běn)中自身(shēn)存在的NAD(P)H會產(chǎn)生一定(dìng)的(dí)背(bèi)景幹擾，因(yīn)此(cǐ)在測(cè)定(dìng)過(guò)程中需(xū)要設定(dìng)對照孔(kǒng)排(pái)除(chú)這(zhè)種(zhǒng)幹(gān)擾(rǎo)。

試劑(jì)準備

① 檢測(cè)前(qián)，試(shì)劑盒中的試劑平衡(héng)至室溫(wēn)。

② 試(shì)劑二(èr)工作液的配製：

取一支(zhī)試劑二(èr)粉劑(jì)用0.17 mL試(shì)劑一充(chōng)分溶解，臨(lín)用前配製(zhì)，於冰(bīng)盒上(shàng)取(qǔ)用，-20℃避光可保存7天(tiān)。

③ 試劑三工(gōng)作液的(dí)配製：

取一(yī)支試(shì)劑(jì)三(sān)粉劑(jì)用(yòng)0.3 mL的(dí)試劑一充(chōng)分溶(róng)解，臨(lín)用前配製，於(yú)冰(bīng)盒(hé)上(shàng)取用(yòng)，-20℃避(bì)光(guāng)可(kě)保存7天。

④ 測(cè)定工作液的配製(zhì)：

按照試劑一(yī)：試(shì)劑二工(gōng)作(zuò)液：試(shì)劑(jì)三工(gōng)作液(yè)：試劑(jì)四(sì) = 8：1：1：10的體積比混(hùn)匀(yún)，按(àn)需要(yào)現配(pèi)現(xiàn)用(yòng)，避(bì)光保(bǎo)存(cún)。

實(shí)驗關(guān)鍵點(diǎn)

① 試(shì)劑一取用(yòng)時應(yīng)倒出部(bù)分，再(zài)取用，避免試(shì)劑汙染。

② 樣本(běn)加(jiā)入板(bǎn)孔(kǒng)中時應(yīng)觸底加入(rù)。

操(cāo)作步驟

① 測(cè)定(dìng)孔：向酶標板對應的(dí)測定(dìng)孔中加入(rù)50μL的待測(cè)樣本；

標準孔：向酶(méi)標(biāo)板對應的(dí)標(biāo)準孔中加入(rù)50μL不(bù)同(tóng)濃(nóng)度(dù)的標準(zhǔn)品(pǐn)溶液(yè)；

② 向步驟①中各(gè)孔(kǒng)分別加入(rù)50μL的(dí)測(cè)定工(gōng)作液(yè)；

③ 酶(méi)標(biāo)儀(yí)上(shàng)振(zhèn)板5 s，然後(hòu)放入(rù)37℃恒(héng)溫箱(xiāng)中，孵(fū)育30 min，於(yú)波(bō)長(cháng)450 nm 處(chǔ)測(cè)定(dìng)各(gè)孔OD值(zhí)。

(注：隨(suí)著孵育(yù)時間(jiān)延長，顯(xiǎn)色會加(jiā)深，在保證樣(yàng)本正(zhèng)常(cháng)顯色的情(qíng)況(kuàng)下，盡(jìn)量(liáng)使(shǐ)標準曲(qū)綫(xiàn)最(zuì)高(gāo)點的OD值(zhí)處(chǔ)於(yú)1.5-2.0的(dí)範圍(wéi)內(nèi))

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