酶聯免疫吸(xī)附(fù)測(cè)定法 (enzyme-linked immunosorbent assay)，簡稱 ELISA，是(shì)用於檢測(cè)體(tǐ)液(yè)中微量(liáng)物(wù)質(zhì)的(dí)固相免疫測(cè)定(dìng)方法
。它是一(yī)種特殊(shū)的試劑分(fēn)析(xī)方(fāng)法，是(shì)在免疫酶(méi)技(jì)術( immunoenzymatic techniques ) 的基(jī)礎上(shàng)發展(zhǎn)起(qǐ)來的(dí)一(yī)種新(xīn)型的免(miǎn)疫(yì)測定技術
。那麼你知道(dào)ELISA實(shí)驗(yàn)的關鍵點是什麼嗎？讓(ràng)我們(mén)一起(qǐ)來(lái)看(kàn)看(kàn)吧！
 

　　一
，樣本的儲存
 

　　合(hé)適(shì)的保存環(huán)境(jìng)可(kě)以(yǐ)確保生物樣(yàng)本(běn)在(zài)後(hòu)續(xù)實驗和(hé)研(yán)究(jiū)中的可(kě)靠性和穩定(dìng)性(xìng)，樣本(běn)長(cháng)期(qī)保存建議在(zài)-80℃保存，1-2個(gè)月(yuè)內在(zài)-20℃保存，開展檢測時需分裝後保存4℃，並建(jiàn)議當天(tiān)短暫(zàn)保(bǎo)存，單次(cì)使(shǐ)用後丟棄(qì)剩餘部(bù)分
。
 

　　為避免樣本的(dí)蛋(dàn)白質(zhì)結(jié)構(gòu)和(hé)活(huó)性受(shòu)損，盡量避(bì)免多次(cì)凍融(róng)，凍(dòng)融次數(shù)對檢測結果(guǒ)的(dí)的影響(xiǎng)是不(bù)容小(xiǎo)覷的(dí)
。經(jīng)測試對(duì)比發(fā)現：有(yǒu)些因子(zǐ)凍(dòng)融2到(dào)3次(cì)甚至已(yǐ)經降到非常低(dī)的(dí)含量水(shuǐ)平，如大(dà)家經(jīng)常關注到的炎症因子IL-1β
，IL-15
，IL-17
，CXCL8等
。
 

　　二
，樣本內(nèi)外源性(xìng)物質
 

　　免(miǎn)疫方法檢(jiǎn)測中，內源性等(děng)因(yīn)素幹擾(自身(shēn)抗體(tǐ)
，異嗜性(xìng)抗體
，人抗(kàng)動物抗體(tǐ)及其(qí)他一些結(jié)合蛋白(bái)等(děng))
，脂血
，交叉反應(yīng)
，一些分(fēn)析前(qián)變異(標本溶(róng)血(xiě)
，標(biāo)本被細菌汙染(rǎn)
，標(biāo)本貯存過久
，標本(běn)凝集不全和采血(xiě)管(guǎn)中(zhōng)添(tiān)加物(wù)等(děng))
，基(jī)質(zhì)效(xiào)應甚至(zhì)檢測(cè)設備的不同(tóng)，均(jūn)可對檢(jiǎn)測(cè)結果造成幹擾，引(yǐn)起許(xǔ)多檢(jiǎn)測(cè)結果的假性升高(gāo)或降(jiàng)低，包括激素(sù)
，各類標誌(zhì)物
，藥(yào)物和(hé)病原微生(shēng)物的(dí)血(xiě)清學(xué)檢測等
。
 

　　科研人員(yuán)應(yīng)充分(fēn)認(rèn)識(shí)免疫檢測中(zhōng)的各類(lèi)幹擾因素(sù)，在(zài)出現(xiàn)結(jié)果不符(包括檢測(cè)結(jié)果(guǒ)與臨(lín)床症狀不符(fú)
，檢測預期與文獻不符(fú))時(shí)進(jìn)行原因分(fēn)析，如檢(jiǎn)測的(dí)樣本類型(xíng)是(shì)否與(yǔ)所選(xuǎn)試劑(jì)盒匹(pǐ)配(pèi)
。
 

　　三(sān)
，樣(yàng)本(běn)造(zào)模(mó)
 

　　生(shēng)物(wù)學(xué)實驗(yàn)中(zhōng)影(yǐng)響(xiǎng)造模成功(gōng)的(dí)因素很(hěn)多(duō)，需要綜合考(kǎo)慮各種因素，以確(què)保模(mó)型(xíng)的(dí)可(kě)靠性(xìng)和準確(què)性：
 

　　設置(zhì)對照(zhào)：在(zài)實驗(yàn)造模(mó)中(zhōng)，設置對照可(kě)以(yǐ)幫(bāng)助確(què)定(dìng)造(zào)模(mó)是否(fǒu)成功
。例如(rú)，實(shí)驗組和對照組(zǔ)在實驗(yàn)處(chǔ)理(lǐ)後表現(xiàn)出(chū)不(bù)同(tóng)的(dí)生(shēng)理或生化(huà)反應，則(zé)可(kě)以認(rèn)為造(zào)模是(shì)成(chéng)功(gōng)的
。此外，通(tōng)過(guò)對照(zhào)還(huán)可(kě)以評(píng)估實(shí)驗的可靠性(xìng)，例如評(píng)估(gū)實(shí)驗結(jié)果的重復性和穩定性
。
 

　　多學科(kē)驗證(zhèng)：在(zài)生物學(xué)實驗(yàn)中(zhōng)，確定造(zào)模(mó)和對照是否(fǒu)成功需要(yào)考慮(lǜ)多(duō)個(gè)方麵
。如(rú)：觀察實(shí)驗(yàn)動物病(bìng)理(lǐ)症(zhèng)狀
，檢測生理指標
，檢(jiǎn)測(cè)生化(huà)指標
，組織(zhī)病理(lǐ)學(xué)檢查(chá)
，統計學分(fēn)析等(děng)；
 

　　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：不同種類(lèi)的實(shí)驗(yàn)動物對(duì)模型(xíng)的(dí)反(fǎn)應可能不同
。例如，某些藥(yào)物(wù)在(zài)小鼠(shǔ)和(hé)大鼠中(zhōng)的反應可(kě)能(néng)會(huì)有所(suǒ)不同(tóng)
。因此，選擇(zé)適(shì)當的實驗(yàn)動物種類對於造模(mó)成功(gōng)至(zhì)關重(zhòng)要(yào)
。
 

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