產(chǎn)品(pǐn)名稱(chēng)：瓊脂(zhī)糖凝(níng)膠(jiāo)DNA回(huí)收(shōu)試(shì)劑(jì)盒

產(chǎn)品貨號(hào)：TD407- 10 (10 次(cì)反(fǎn)應(yīng))

     TD407-50 (50 次(cì)反(fǎn)應)

     TD407-200 (200 次反(fǎn)應(yīng))

產品亮點：

• 從瓊脂糖(táng)凝(níng)膠(jiāo)中快速（15分(fēn)鐘(zhōng)）高產(chǎn)量地(dì)回(huí)收超純的DNA.

• 微量柱設計使得DNA可以在(zài)高(gāo)濃(nóng)度(dù)下洗(xǐ)脫到最(zuì)小體積(jī)（≥10 µl）.

• 洗脫(tuō)的(dí)DNA非常(cháng)適合(hé)用於(yú)DNA連接，測(cè)序(xù)，標記(jì)，PCR等應(yīng)用
。

產品組(zǔ)分(fēn)：

產品(pǐn)特性：

DNA純(chún)度-洗脫到(dào)的(dí)高(gāo)質(zhì)量(liáng)，純化(huà)的(dí) DNA 尤其適(shì)用於 DNA 測序(xù), DNA 連接(jiē), 內(nèi)切酶消(xiāo)化(huà),基因(yīn)芯片；

DNA大小-50 bp 到(dào) 23 kb 之(zhī)間；

DNA回收(shōu)率(shuài)-一般(bān)的(dí)，可(kě)在 10 µl 的(dí)水中(zhōng)洗脫(tuō)出(chū) 5 µg 的(dí) DNA
。對於(yú)從(cóng) 50bp 到(dào)10kb 的DNA，回收(shōu)率為 70%-90% ，對於從(cóng) 11kb 到(dào) 23kb 的(dí) DNA ，回收率(shuài)為(wéi) 50-70%；

樣品來(lái)源(yuán)-來自 PCR， 限製(zhì)性內切酶消(xiāo)化， 質粒(lì)抽(chōu)提(tí)， 激酶(méi)反(fǎn)應，等的(dí)DNA和(hé)在(zài)TAE 或(huò)TBE緩衝(chōng)的瓊脂(zhī)糖凝(níng)膠(jiāo)切(qiē)片中的(dí) DNA
。

緩衝液製(zhì)備(bèi)：

DNA在使用之前一定要配好，添加好(hǎo)乙(yǐ)醇(chún)後(hòu)在試劑瓶上做好(hǎo)標(biāo)記！！！

10次反應的DNA洗滌(dí)液(yè)應(yīng)按(àn)照標簽上的提示添加(jiā)100%的乙醇(chún)；

50次(cì)反(fǎn)應的(dí)DNA應添(tiān)加(jiā)24ml 100%的乙醇(26 ml 95%的乙(yǐ)醇)到(dào)6ml的(dí)DNA中；

100次反(fǎn)應的DNA應添加(jiā)48ml 100%的(dí)乙醇(52 ml 95%的乙醇)到(dào)12ml的DNA中(zhōng)；

200次(cì)反應(yīng)的(dí)DNA應添(tiān)加96ml 100%的乙(yǐ)醇(chún)(104 ml 95%的乙醇(chún))到24ml的(dí)DNA中(zhōng)
。

實(shí)驗流程(chéng)：

以下(xià)離(lí)心操作(zuò)步(bù)驟的(dí)離心力均在 10,000 - 16,000 x g 之(zhī)間進(jìn)行
。

1. 使用(yòng)刀(dāo)片或手(shǒu)術(shù)刀(dāo)把(bǎ) DNA 片段(duàn)從(cóng)瓊(qióng)脂(zhī)糖(táng)凝(níng)膠上(shàng)切除(chú)下來(lái)並且(qiě)移置到 1.5 ml 小型(xíng)離心(xīn)管(guǎn)內. 注(zhù)意(yì): 從(cóng)凝膠上切下的(dí)瓊脂(zhī)糖(táng)盡(jìn)可能的(dí)要(yào)少.

2. 將(jiāng) 3 倍(bèi)體(tǐ)積的ADB溶(róng)膠(jiāo)液 添加(jiā)到每(měi) 1 體(tǐ)積從凝膠上切下的(dí)瓊脂(zhī)糖切(qiē)塊中(zhōng). 例如: 對於 100 µl (mg) 的瓊脂糖(táng)凝(níng)膠切塊 ， 添 加(jiā) 300 µl 的 ADB 緩衝液 .

3. 在 37-55 ℃下溫(wēn)水浴 10 分(fēn)鐘(zhōng)直(zhí)到凝膠切塊(kuài)溶解. 注意: 確(què)定凝(níng)膠(jiāo)切塊解是很(hěn)重要(yào)的(dí)步(bù)驟. 在(zài)溫水浴(yù)過(guò)程中(zhōng)可輔(fǔ)以溫(wēn)和(hé)的攪(jiǎo)拌(bàn)有助於凝(níng)膠(jiāo)的(dí)溶解(jiě)
。如果DNA 大小超(chāo)過 8kb ，加(jiā)熱(rè)之後需(xū)要額外添(tiān)加(jiā)等(děng)量(liáng)膠塊(kuài)體(tǐ)積(jī)的(dí)水(shuǐ)
。例(lì)如(rú)： 100 µl (mg) 的瓊脂(zhī)糖凝膠切塊(kuài)，添(tiān)加(jiā) 300 µl 的(dí) ADB 緩衝液(yè).加熱(rè)之後(hòu)添加 100µl 的水
。

4. 將(jiāng)溶解(jiě)的瓊脂(zhī)糖切塊(kuài)溶(róng)液放到 1號(hào)C 中並(bìng)把柱套在收集(jí)管裏(lǐ).

5. 離(lí)心 1 分(fēn)鐘後(hòu). 倒(dǎo)掉過濾(lǜ)液. 注意: 柱(zhù)所能容(róng)納的(dí)樣(yàng)品(pǐn)體積為(wéi) 800 µl. 所以(yǐ), 如果樣品體積超過 800 µl 時， 柱(zhù)就(jiù)要(yào)被多(duō)次(cì)填(tián)充(chōng)和離(lí)心
。

6. 添(tiān)加(jiā) 200µl 的(dí) DNA洗滌液 到(dào)柱中離心 1 分鐘， 去除濾(lǜ)出液(yè).

7. 重復(fù)第 6 步洗(xǐ)滌步(bù)驟(zhòu).

8. 可選(xuǎn)步驟： 將收集管中的廢液(yè)倒(dǎo)掉(diào)，並將 1號C 套(tào)回 收(shōu)集管 中(zhōng)額(é)外(wài)離心(xīn)2 分鐘(zhōng)，盡(jìn)量除去洗(xǐ)滌(dí)液，以免(miǎn)洗滌液中(zhōng)殘留(liú)乙(yǐ)醇抑製下(xià)遊反(fǎn)應
。

8. 直(zhí)接添加(jiā) 10 µl DNA洗脫(tuō)液 到柱(zhù)基質中(zhōng). 將(jiāng)柱(zhù)套(tào)在 1.5 ml 離(lí)心管中(zhōng)離(lí)心1 分(fēn)鐘(zhōng)來(lái)洗(xǐ)脫DNA.

注意: 從(cóng)柱中洗(xǐ)脫出的(dí) DNA 產(chǎn)量與 pH 和溫度有關. 如(rú)果(guǒ)使(shǐ)用(yòng)水來洗(xǐ)脫， 確(què)保(bǎo) pH 是(shì) >6.0. 在(zài)向柱中加入水後(hòu)靜置(zhì) 1 分(fēn)鐘(zhōng)可增加(jiā)較(jiào)大 (> 6 kb) DNA 的(dí)產(chǎn)量.在 60-70 oC 的(dí)水中(zhōng)洗脫(tuō) DNA 可增加較大(dà)DNA (> 10 kb)的(dí)產量
。

注意: 如果(guǒ)試驗需(xū)要的話(huà) TE 緩(huǎn)衝液 (10mMTris-HCl ， 1mM EDTA ， pH8.0) 或(huò)改進的(dí) TE(10mM Tris-HCl ， 0.1mMEDTA ， pH8.5) 也可(kě)用來(lái)洗脫.

得到的超純 DNA 可(kě)進(jìn)行(háng)後(hòu)續(xù)試驗(yàn)了(liǎo)！

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