產(chǎn)品名(míng)稱(chēng)：瓊脂(zhī)糖凝膠DNA回(huí)收(shōu)試劑盒(hé)

產品貨號(hào)：TD408- 10 (10 次反(fǎn)應(yīng))

TD408-50 (50 次反應(yīng))

TD408-200 (200 次(cì)反(fǎn)應(yīng))

產品(pǐn)特點：

可(kě)在(zài) 25 µl 的洗脫液(yè)中(zhōng)回(huí)收到超純的(dí) DNA，並且對(duì)於(yú)一(yī)係(xì)列(liè)下遊(yóu)的(dí)分子生(shēng)物實(shí)驗非(fēi)常理想. 

此過程(chéng)與(yǔ) TAE 或(huò)者 TBE 緩衝的凝(níng)膠(jiāo)是兼容(róng)的. 

切下範圍(wéi)在(zài) 50bp 到(dào) 23kb 之(zhī)間(jiān)的 DNA 回收率(shuài)為(wéi) 50%-90%. 並且不會發(fā)生(shēng)像(xiàng)常(cháng)在玻(bō)璃奶和(hé)基於陽粒子(zǐ)樹脂(zhī)過程(chéng)中的 DNA 切變現象(xiàng). 

本(běn)產品僅供(gōng)科(kē)研(yán)使(shǐ)用

試劑製(zhì)備：

DNA在使(shǐ)用之(zhī)前一定要配(pèi)好，添加好(hǎo)乙醇後在(zài)試(shì)劑(jì)瓶上(shàng)做好(hǎo)標(biāo)記(jì)！！！

10次反應的(dí)DNA洗(xǐ)滌(dí)液應按照(zhào)標簽上的提示(shì)添加100%的乙醇；

50次(cì)反應的DNA應(yīng)添加24ml 100%的乙(yǐ)醇(chún)(26 ml 95%的乙醇(chún))到6ml的(dí)DNA中(zhōng)；

100次反(fǎn)應(yīng)的(dí)DNA應添加(jiā)48ml 100%的乙醇(52 ml 95%的(dí)乙(yǐ)醇(chún))到(dào)12ml的(dí)DNA中；

200次反(fǎn)應(yīng)的(dí)DNA應(yīng)添加(jiā)96ml 100%的乙(yǐ)醇(104 ml 95%的(dí)乙(yǐ)醇)到(dào)24ml的DNA中。

產(chǎn)品特(tè)性：

DNA純(chún)度(dù)-洗(xǐ)脫(tuō)到的高質(zhì)量(liáng)，純化的 DNA 尤(yóu)其適(shì)用於 DNA 測序(xù), DNA 連接(jiē), 內切(qiē)酶消(xiāo)化(huà),基(jī)因芯片；

DNA大小-50 bp 到 23 kb 之間(jiān)；

DNA回收率(shuài)-一(yī)般(bān)的(dí)，可在 10 µl 的(dí)水中(zhōng)洗(xǐ)脫(tuō)出(chū) 5 µg 的(dí) DNA 。對於從(cóng) 50bp 到(dào)10kb 的DNA，回(huí)收率為 70%-90% ，對於從 11kb 到 23kb 的 DNA ，回(huí)收率為(wéi) 50-70%；

樣(yàng)品來源(yuán)-來自(zì) PCR， 限製性內切(qiē)酶(méi)消(xiāo)化， 質(zhì)粒(lì)抽提(tí)， 激酶反應，等的(dí)DNA和(hé)在(zài)TAE 或TBE緩(huǎn)衝的瓊脂糖(táng)凝膠切片中的 DNA。

產品特(tè)點(diǎn)：

1. 使用(yòng)了(liǎo)優質溶膠液，不抑製回(huí)收後酶切(qiē)，連(lián)接克隆等(děng)下(xià)遊反應。

2. 改(gǎi)進的溶(róng)膠液配(pèi)方(fāng),大大提(tí)高了緩衝(chōng)能力(lì)和(hé)穩定(dìng)性(xìng)，即使樣(yàng)品(pǐn)變(biàn)化很大也能將(jiāng)PH 緩衝在最佳結(jié)合(hé)範圍(wéi)內。

3. 快速(sù)，方(fāng)便，不需要使(shǐ)用(yòng)有毒的苯酚，氯仿(fǎng)等(děng)試(shì)劑(jì)，也(yě)不(bù)需(xū)要(yào)乙醇沉(chén)澱。

4. 此(cǐ)試劑盒(hé)中(zhōng)吸附膜(mó)吸附(fù)DNA的效率很高(gāo)。但如果切(qiē)下來的(dí)凝(níng)膠中含(hán)有電泳緩(huǎn)衝液太多(duō)，造成溶(róng)膠(jiāo)後(hòu)溶膠液(yè)pH偏(piān)高(gāo)，會導(dǎo)致回收率降(jiàng)低。

操作方(fāng)案(àn)：

以(yǐ)下離心(xīn)操(cāo)作(zuò)步驟的(dí)離心力(lì)均在(zài) 10,000 - 16,000 x g 之間(jiān)進(jìn)行。

1. 使(shǐ)用刀(dāo)片或(huò)手(shǒu)術(shù)刀(dāo)把 DNA 片段(duàn)從瓊脂糖凝膠(jiāo)上切除(chú)下來並且移置到 1.5 ml 小(xiǎo)型(xíng)離心(xīn)管內.

Note: 從凝(níng)膠上切下的(dí)瓊脂(zhī)糖盡可能的要少(shǎo).

2. 將 3 倍體積的(dí) 溶膠液 添(tiān)加(jiā)到每 1 體積從凝(níng)膠(jiāo)上切下(xià)的(dí)瓊脂糖切塊(kuài)中.

Example:對(duì) 於(yú) 200 µl (mg) 的 瓊 脂(zhī) 糖 凝 膠 切 塊(kuài) ， 添 加(jiā) 600 µl 的(dí) ADB 緩衝(chōng)液.

3. 在(zài) 37-55C 下溫(wēn)水浴 10~20 分鐘直到凝膠切塊溶解(jiě).

Note: 確定(dìng)凝膠切塊溶(róng)解是(shì)很重(zhòng)要的步(bù)驟(zhòu). 在(zài)溫水浴(yù)過程中可(kě)輔(fǔ)以溫和的攪拌有助於凝膠的(dí)溶解。 如(rú)果 DNA 大小超過 8kb ，加熱(rè)之(zhī)後需要額外添(tiān)加(jiā)等(děng)量膠(jiāo)塊(kuài)體(tǐ)積的(dí)水(shuǐ)。例(lì)如： 200 µl (mg) 的瓊(qióng)脂糖凝膠切(qiē)塊(kuài)，添(tiān)加 600 µl 的 ADB 緩衝(chōng)液(yè).加熱之後(hòu)添(tiān)加 200µl 的水。

4. 將溶(róng)解的(dí)瓊脂糖(táng)切(qiē)塊溶(róng)液放(fàng)到 2 號柱 中(zhōng)並把(bǎ)柱(zhù)套(tào)在(zài) 收集(jí)管 裏.

5. 離(lí)心(xīn) 1 分(fēn)鐘. 去除(chú)濾出(chū)液. Note: 柱所能(néng)容納的(dí)樣品(pǐn)體(tǐ)積(jī)為 800 µl. 所(suǒ)以(yǐ), 如果樣(yàng)品體(tǐ)積(jī)超(chāo)過 800 µl 時，柱(zhù)就(jiù)要被多(duō)次填充和(hé)離(lí)心。

6. 添加 200 µl 的 DNA 洗滌(dí)液 到(dào)柱(zhù)中離心(xīn) 1 分鐘(zhōng)，去(qù)除濾(lǜ)出液(yè).

7. 重(zhòng)復(fù)第 6 步洗(xǐ)滌步(bù)驟.

8. 可選步驟：將(jiāng)收集管中的(dí)廢液(yè)倒(dǎo)掉，並將 2 號柱(zhù)套回收集(jí)管(guǎn)中(zhōng)額外離(lí)心2 分鐘，盡量(liáng)除去(qù)洗滌(dí)液，以免洗滌液中(zhōng)殘留乙醇抑製下遊反(fǎn)應。

9. 直接(jiē)添加 25 µl DNA 洗脫(tuō)液到(dào)柱基(jī)質中. 將柱套(tào)在(zài) 1.5 ml 離(lí)心(xīn)管中(zhōng)離心 1 分(fēn)鐘來洗(xǐ)脫(tuō)

DNA.Note :從柱中洗脫出(chū)的(dí) DNA 產量(liáng)與 pH 和溫度有(yǒu)關(guān). 如果(guǒ)使用水來洗(xǐ)脫， 確(què)保(bǎo) pH 是>6.0. 在向(xiàng)柱(zhù)中加入水後靜置 1 分(fēn)鐘可增加(jiā)較大(dà) (> 6 kb) DNA 的產(chǎn)量.在(zài) 60-70 oC 的水(shuǐ)中洗脫(tuō) DNA 可(kě)增加較大DNA(> 10 kb)的產量(liáng)

Note: 如果試驗(yàn)需(xū)要的話(huà) TE 緩衝(chōng)液(yè) (10 mM Tris-HCl， 1 mM EDTA， pH 8.0) 或改進的TE (10 mMTris-HCl， 0.1 mM EDTA， pH 8.5) 也(yě)可用(yòng)來洗脫.

在(zài)水(shuǐ)中得(dé)到(dào)的超純(chún) DNA 可進行後(hòu)續(xù)試驗.

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