產品名稱：abcam重(zhòng)組(zǔ)CD133抗體[EPR16508](ab222782)現貨供應

產(chǎn)品貨(huò)號：ab222782

產(chǎn)品(pǐn)品牌：abcam

產品主要特(tè)點(diǎn)和(hé)細節(jié)：

l 重組(zǔ)生產（無動(dòng)物(wù)成分(fēn)）
，具有批次間(jiān)的高(gāo)一致性(xìng)和(hé)長期供(gōng)應(yīng)安(ān)全

l 兔單克(kè)隆抗體(tǐ)[EPR16508] to CD133

l 適(shì)用(yòng)於：免疫印跡，免疫組(zǔ)化-P

l 淘汰(tài)賽驗證

l 與反(fǎn)應(yīng)： Human

實驗方(fāng)案：

蛋(dàn)白質印跡實驗(yàn)方案：

1. 樣(yàng)品裂(liè)解

l 從細胞(bāo)培(péi)養物中(zhōng)製備裂解物(wù)

(1) 將(jiāng)細(xì)胞(bāo)培養(yǎng)皿放在冰上(shàng)
，用冰冷的PBS清(qīng)洗(xǐ)細(xì)胞(bāo)。

(2) 吸出 PBS
，然後加入冰冷的(dí)裂解緩衝(chōng)液（每(měi) 10 mL7細(xì)胞(bāo)/100 mm 培養皿(mǐn)/150 cm²瓶;每 5x10 0.5 mL6細胞/60 mm 培(péi)養皿(mǐn)/75 cm2燒瓶(píng)）。

(3) 使用(yòng)冷塑(sù)料細(xì)胞(bāo)刮(guā)刀(dāo)從(cóng)培(péi)養皿上刮下貼(tiē)壁(bì)細胞
，然後輕輕地將(jiāng)細(xì)胞(bāo)懸液(yè)轉(zhuǎn)移到(dào)預(yù)冷的微(wēi)量(liáng)離(lí)心(xīn)管(guǎn)中。或者
，在微(wēi)量離心管中(zhōng)的裂(liè)解緩衝液中重(zhòng)懸之前(qián)
，可以胰(yí)蛋(dàn)白(bái)酶消化並用PBS洗(xǐ)滌(dí)細胞。

(4) 在 4°C 下保(bǎo)持恒(héng)定(dìng)攪(jiǎo)拌 30 分鐘。

(5) 在4°C的微量(liáng)離(lí)心(xīn)機中(zhōng)離(lí)心細(xì)胞懸(xuán)液(yè)。 您可(kě)能需要根(gēn)據細胞類型改變(biàn)離心力(lì)和時(shí)間(jiān);指南(nán)是(shì)在 14,000–17,000 g 下 5 分鐘
，但這必須為(wéi)您的(dí)實驗確(què)定(dìng)（白細(xì)胞(bāo)需要非(fēi)常(cháng)輕(qīng)的離(lí)心）。

(6) 輕(qīng)輕地從(cóng)離(lí)心機(jī)中取出(chū)試管並放(fàng)在冰上
，吸出上(shàng)清液(yè)並(bìng)放入(rù)保持在冰(bīng)上(shàng)的新(xīn)鮮(xiān)試(shì)管(guǎn)中(zhōng)
，然後丟棄沉(chén)澱(diàn)。

l 從組織中製(zhì)備(bèi)裂解物(wù)

(1) 用幹淨的(dí)工具解剖(pōu)感(gǎn)興趣的(dí)組(zǔ)織(zhī)
，最好在冰上(shàng)解剖(pōu)
，並盡快(kuài)防止(zhǐ)蛋白酶降解(jiě)。

(2) 將(jiāng)組織(zhī)放入圓底微量(liáng)離(lí)心管(guǎn)或Eppendorf管中
，並(bìng)浸入液氮中以快(kuài)速(sù)冷凍。將(jiāng)樣品(pǐn)儲(chǔ)存(cún)在 -80°C 以(yǐ)備後(hòu)用
，或(huò)放在(zài)冰(bīng)上(shàng)立即(jí)均(jūn)質化。對於~5mg組(zǔ)織(zhī)
，向試(shì)管中(zhōng)快速加(jiā)入~300μL冰冷裂解緩衝液(yè)
，用(yòng)電動(dòng)均質(zhì)器匀(yún)漿
，用(yòng)另(lìng)一個(gè)2×200μL裂解(jiě)緩衝(chōng)液(yè)衝(chōng)洗刀(dāo)片兩(liǎng)次
，然(rán)後(hòu)在4°C下保(bǎo)持(chí)恒定攪拌2小(xiǎo)時(shí)（例如
，放在冰(bīng)箱中的軌道振蕩器(qì)上(shàng)）。裂解緩衝液(yè)的體積必須根據(jù)存(cún)在的(dí)組織(zhī)量(liáng)來確(què)定;蛋(dàn)白(bái)質提(tí)取(qǔ)物不應(yīng)太稀(xī)釋(shì)
，以(yǐ)免(miǎn)蛋白質(zhì)損失和(hé)大量樣(yàng)品(pǐn)上樣(yàng)到(dào)凝膠上。濃度下(xià)限(xiàn)為 0.1 mg/mL
，最佳(jiā)濃度為 1–5 mg/mL。

(3) 在(zài)微量(liáng)離心機(jī)中(zhōng)以(yǐ) 14,000–17,000 g 在 4°C 下離心 5–10 分鐘。輕輕地(dì)從離(lí)心機(jī)中(zhōng)取(qǔ)出試(shì)管
，放在冰上
，吸(xī)出(chū)上清(qīng)液
，然(rán)後放(fàng)入(rù)保(bǎo)持(chí)在冰上的(dí)新鮮試(shì)管中;丟棄顆(kē)粒。

2. 樣(yàng)品(pǐn)製(zhì)備

(1) 除去(qù)少量(liáng)裂解(jiě)物以進(jìn)行蛋白(bái)質定量測定(dìng)。確(què)定(dìng)每(měi)種細胞裂解物(wù)的蛋白質濃(nóng)度。

(2) 確(què)定要加載多(duō)少蛋(dàn)白質並加(jiā)入等(děng)體(tǐ)積的 2X Laemmli 樣品緩(huǎn)衝(chōng)液(yè)。

(3) 我(wǒ)們(mén)建(jiàn)議使(shǐ)用(yòng)以下方(fāng)法對樣(yàng)品進(jìn)行(háng)還(huán)原和(hé)變性
，除(chú)非在(zài)綫(xiàn)抗(kàng)體數據表表(biǎo)明應使用(yòng)非(fēi)還(huán)原和(hé)非變性條件(jiàn)。

(4) 為(wéi)了(liǎo)減(jiǎn)少樣(yàng)品(pǐn)和變性
，將(jiāng)每個(gè)細(xì)胞(bāo)裂解(jiě)物在樣品緩(huǎn)衝(chōng)液中在(zài)100°C下煮(zhǔ)沸5分(fēn)鐘。裂(liè)解物可以等分並儲存(cún)在(zài) -20°C 以(yǐ)備將(jiāng)來(lái)使用(yòng)。

3. 抗(kàng)體(tǐ)染(rǎn)色

(1) 使(shǐ)用封閉緩衝(chōng)液(yè)在室溫下封閉膜1小時或在(zài)4°C下過夜(yè)。

(2) 在封閉(bì)緩衝(chōng)液(yè)中用適(shì)當(dāng)稀釋的一抗孵(fū)育膜。我(wǒ)們(mén)建議在 4°C 下(xià)孵育(yù)過(guò)夜(yè);其(qí)他(tā)條件可(kě)以優化。

(3) 用三(sān)次TBST洗滌(dí)膜(mó)
，每次5分鐘(zhōng)。

(4) 在(zài)室(shì)溫下(xià)
，在(zài)封閉緩(huǎn)衝液(yè)中用推(tuī)薦(jiàn)的(dí)偶聯二(èr)抗稀釋(shì)液孵(fū)育膜1小時。

(5) 用三(sān)次(cì)TBST洗滌膜
，每次5分鐘(zhōng)。

(6) 對(duì)於(yú)信(xìn)號(hào)開(kāi)發
，請(qǐng)遵(zūn)循套件製造商的建議(yì)。去除多餘的試劑並(bìng)用透明(míng)保鮮膜(mó)覆蓋膜。

(7) 使用(yòng)用(yòng)於化學發(fā)光的暗(àn)室顯(xiǎn)影技術(shù)或(huò)用於比(bǐ)色檢測(cè)的普(pǔ)通(tōng)圖像掃(sǎo)描(miáo)方法獲取圖像。

相(xiāng)關文獻：

[1] Wu J et al. LINC00887 regulates malignant progression and T-cell chemotaxis in clear cell renal cell carcinoma by activating CD70 via recruitment of SPI1. Gene 893:147910 (2024).

[2] Liu Y et al. UPK1B promoted the invasion and stem cell characteristics of non-small cell lung cancer cells by modulating c-myc/Sox4 axis. Tissue Cell 85:102250 (2023).

[3] Zheng X et al. Generation of inactivated IL2RG and RAG1 monkeys with severe combined immunodeficiency using base editing. Signal Transduct Target Ther 8:327 (2023).

[4] Zheng X et al. Generation of inactivated IL2RG and RAG1 monkeys with severe combined immunodeficiency using base editing. Signal Transduct Target Ther 8:327 (2023).

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