細胞凋(diāo)亡的過程在(zài)不同(tóng)點受到嚴格(gé)調控(kòng)，因(yīn)此可以(yǐ)評(píng)估所(suǒ)涉(shè)及的(dí)不(bù)同蛋(dàn)白質的(dí)活(huó)性(xìng)。由(yóu)於細(xì)胞(bāo)凋亡(wáng)和壞(huài)死的過(guò)程(chéng)可能(néng)重疊，因此(cǐ)必須通過(guò)兩種不同的(dí)測(cè)定來確(què)認細(xì)胞死亡的機製。下麵(miàn)讓我(wǒ)們一起(qǐ)來看(kàn)看(kàn)細(xì)胞(bāo)凋(diāo)亡(wáng)的(dí)檢(jiǎn)測方法(fǎ)吧！
 

　　1. 細胞形態學變化
 

　　用(yòng)光(guāng)學顯微鏡(jìng)觀察蘇木精(jīng)和伊紅染(rǎn)色的組織切(qiē)片可(kě)以(yǐ)觀察到(dào)凋亡細(xì)胞(bāo)。該(gāi)方(fāng)法檢(jiǎn)測的(dí)是(shì)處於(yú)凋亡(wáng)後(hòu)期(qī)的(dí)細(xì)胞(bāo)，但不(bù)能(néng)識別(bié)處於(yú)凋(diāo)亡(wáng)早(zǎo)期(qī)的(dí)細胞(bāo)。透(tòu)射電(diàn)子顯(xiǎn)微鏡(TEM)是(shì)確(què)認細(xì)胞凋亡(wáng)的(dí)金標(biāo)準。
 

　　2. DNA
 

　　DNA laddering 技術是另一種(zhǒng)檢(jiǎn)測細胞凋亡的方(fāng)法(fǎ)，它使細(xì)胞(bāo)凋(diāo)亡過(guò)程中核酸內切酶(méi)切割的產物可(kě)視(shì)化。這涉(shè)及(jí)通(tōng)過瓊脂糖凝(níng)膠(jiāo)電泳從裂解的(dí)細(xì)胞匀漿分離(lí)中提取 DNA。所(suǒ)得 DNA 條(tiáo)帶形成(chéng) DNA 階梯(tī)，可用於檢(jiǎn)測(cè)凋(diāo)亡細胞數量(liáng)高的(dí)組(zǔ)織(zhī)中的(dí)細胞凋亡。然而，DNA 發(fā)生(shēng)在(zài)細(xì)胞凋亡的(dí)後(hòu)期階(jiē)段，因(yīn)此無(wú)法(fǎ)檢測早(zǎo)期階段(duàn)的(dí)細(xì)胞。另(lìng)一(yī)種方法(fǎ)是(shì) TUNEL(Terminal dUTP Nick End-Labeling)方(fāng)法(fǎ)，它也通(tōng)過酶法標(biāo)記(jì) DNA 鏈(liàn)的末(mò)端來(lái)檢(jiǎn)測核(hé)酸內(nèi)切酶(méi)切割產物(wù)。末(mò)端轉(zhuǎn)移酶用(yòng)於將 dUTP 連接到 DNA 片(piàn)段(duàn)的(dí) 3' 端(duān)。然後(hòu)用各種探(tàn)針標記 dUTP，以便通(tōng)過光學(xué)顯微鏡(jìng)，熒(yíng)光(guāng)顯(xiǎn)微(wēi)鏡或流式細(xì)胞術(shù)進行(háng)檢測。雖然這(zhè)種技術很快並且可(kě)以在幾個小時內(nèi)完成，但(dàn)它(tā)可(kě)能會(huì)因(yīn)壞死細胞(bāo)而產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果(guǒ)。
 

　　3. caspases，裂解(jiě)底物，調(tiáo)節劑(jì)和抑製劑的檢測(cè)
 

　　可(kě)以(yǐ)使用(yòng)各種(zhǒng)類(lèi)型(xíng)的(dí)半胱(guāng)天冬酶活性測定來檢測(cè)超過(guò) 13 種已知的參與細胞凋亡(wáng)的半胱(guāng)天(tiān)冬(dōng)酶。一(yī)些(xiē)免(miǎn)疫(yì)測定可(kě)以(yǐ)檢測裂(liè)解(jiě)的底(dǐ)物(wù)，如 PARP 和已知的(dí)細胞(bāo)修(xiū)飾(shì)，如(rú)磷酸化(huà)組(zǔ)蛋(dàn)白。包括(kuò)蛋(dàn)白(bái)質(zhì)印(yìn)跡，免(miǎn)疫沉(chén)澱和(hé)免疫組織化(huà)學在內的(dí)多種測(cè)定可(kě)用(yòng)於(yú)檢(jiǎn)測半(bàn)胱(guāng)天(tiān)冬酶(méi)活(huó)化。Apoptosis PCR microarray是一(yī)種(zhǒng)較新的方(fāng)法(fǎ)，它使(shǐ)用real-time PCR來(lái)指示大約112個參(cān)與(yǔ)細胞(bāo)凋(diāo)亡的基因的表達(dá)。微(wēi)陣列旨(zhǐ)在生成編碼(mǎ)必(bì)需(xū)受(shòu)體，配體，細胞內調(tiáo)節(jié)劑和(hé)參與(yǔ)程序性細胞死亡調節的轉錄因(yīn)子的基因的表達譜。
 

　　4. 綫(xiàn)粒(lì)體檢測(cè)
 

　　證明細胞色素c釋(shì)放的綫(xiàn)粒體(tǐ)測(cè)定(dìng) 允(yǔn)許(xǔ)檢(jiǎn)測內(nèi)在途徑(jìng)早期階段的變化。激光掃(sǎo)描(miáo)共(gòng)聚(jù)焦顯(xiǎn)微鏡 (LSCM) 創建(jiàn)活細(xì)胞的(dí)薄光(guāng)學(xué)切(qiē)片，然(rán)後用於監(jiān)測一段(duàn)時間內(nèi)完整單細胞(bāo)中的(dí)各種(zhǒng)綫粒體事件(jiàn)。該(gāi)技術可測(cè)量綫粒體通透(tòu)性(xìng)，綫粒(lì)體(tǐ)內膜(mó)去(qù)極(jí)化，綫粒(lì)體氧化還(huán)原(yuán)狀態，Ca2+通量和(hé)活(huó)性(xìng)氧(yǎng)等參(cān)數(shù)。
 

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