細胞復蘇是(shì)指(zhǐ)將凍(dòng)存在(zài)液氮或(huò)者-70℃冰箱中的細胞解(jiě)凍(dòng)之(zhī)後(hòu)重(zhòng)新培養(yǎng)，細(xì)胞恢復生長的過(guò)程(chéng)。當恢(huī)復(fù)到常溫狀態時(shí)，細胞(bāo)的形態(tài)結構(gòu)保(bǎo)持(chí)正常(cháng)，生化(huà)反(fǎn)即(jí)刻恢(huī)復(fù)。細(xì)胞復蘇過程(chéng)升溫(wēn)要快(kuài)，原則(zé)是(shì)慢凍(dòng)快融(róng)，防止在解凍(dòng)過程中水分進入細胞(bāo)，形(xíng)成(chéng)冰晶，影響細胞存活。下麵讓我們(mén)一(yī)起來(lái)看看(kàn)細胞(bāo)復蘇實驗(yàn)的(dí)操(cāo)作步驟與(yǔ)注意事項(xiàng)吧！
 

　　一，操作(zuò)步(bù)驟
 

　　1.將10ml移液管，移液槍(qiāng)，1ml槍(qiāng)頭，50ml離心管，T25培(péi)養(yǎng)瓶，酒精燈，廢(fèi)液(yè)缸等(děng)物品放(fàng)入超淨工作(zuò)台(tái)，紫外(wài)燈照射30min後(hòu)再通(tōng)風30min
；
 

　　2.預熱(rè)培養基
；
 

　　3.用75%酒(jiǔ)精消毒後放(fàng)入(rù)超淨(jìng)工(gōng)作台(tái)
；
 

　　4.將凍存(cún)細胞(bāo)從液氮罐中(zhōng)取(qǔ)出
；
 

　　5.放入(rù)一(yī)次性(xìng)手(shǒu)套於37℃水(shuǐ)浴(yù)鍋中(zhōng)快速晃動(dòng)使(shǐ)其融化
；
 

　　6.用(yòng)75%酒精消毒後(hòu)放(fàng)入(rù)超淨工作台
；
 

　　7.吸取9ml培養(yǎng)基到(dào)50ml離心管(guǎn)中
；
 

　　8.用(yòng)1ml槍頭吸(xī)取解凍的(dí)細胞(bāo)懸液於(yú)離(lí)心(xīn)管(guǎn)中
；
 

　　9.1000r/min,離心5min
；
 

　　10.用(yòng)75%酒精消毒(dú)後(hòu)放入(rù)超(chāo)淨工(gōng)作(zuò)台
；
 

　　11.吸(xī)棄(qì)上清液
；
 

　　12.吸取1ml培養(yǎng)基(jī)重懸細(xì)胞(bāo)，將(jiāng)細胞懸液轉移到培養(yǎng)瓶內(nèi)，補加(jiā)適(shì)量(liáng)培(péi)養(yǎng)基，輕(qīng)輕晃動培(péi)養(yǎng)瓶使(shǐ)細胞分(fēn)布(bù)均(jūn)匀，並做好標(biāo)記
；
 

　　13.在(zài)顯微鏡下(xià)觀察(chá)復(fù)蘇(sū)的細胞密度及(jí)狀(zhuàng)態(tài)
；
 

　　14.將細(xì)胞(bāo)放回二(èr)氧(yǎng)化碳培(péi)養(yǎng)箱中靜置培養。
 

　　二，注(zhù)意事項
 

　　1.從液氮(dàn)罐中取出細(xì)胞時(shí)，應做(zuò)好(hǎo)個人防(fáng)護以免(miǎn)凍傷
；
 

　　2.凍存(cún)細(xì)胞(bāo)取(qǔ)出後，如不能(néng)立即(jí)放入水(shuǐ)浴(yù)鍋中融(róng)化，需將其放在幹冰(bīng)上保(bǎo)存轉(zhuǎn)移
；
 

　　3.細胞水(shuǐ)浴(yù)解凍時間以(yǐ)1min內為(wéi)宜，做到慢凍速(sù)融
；
 

　　4.已解(jiě)凍的(dí)細(xì)胞避免長時(shí)間(jiān)常(cháng)溫(wēn)存(cún)放，需盡快離(lí)心(xīn)去除DMSO
；
 

　　5.剛復蘇的細胞(bāo)貼壁尚不牢(láo)固(gù)，24h內(nèi)不(bù)要(yào)頻繁(fán)觀(guān)察和換液
；
 

　　6.將培(péi)養瓶放入培養(yǎng)箱，並(bìng)將瓶蓋旋鬆(sōng)，以便(biàn)進(jìn)行充分(fēn)的(dí)氣(qì)體交(jiāo)換(如(rú)使用透(tòu)氣性(xìng)瓶蓋(gài)，則無(wú)需旋鬆(sōng)瓶(píng)蓋)。
 

　　更(gēng)多(duō)有(yǒu)關細胞(bāo)復蘇(sū)實(shí)驗的操作步驟與(yǔ)注意事項，請(qǐng)聯(lián)係(xì)天(tiān)津益元利(lì)康(kāng)生物科技有(yǒu)限公司！