細胞培養(yǎng)幾乎是(shì)所有(yǒu)細(xì)胞(bāo)生(shēng)物(wù)學(xué)實驗的(dí)基(jī)礎(chǔ)
。其(qí)中，細胞傳代(dài)是將(jiāng)部分細(xì)胞分(fēn)離出來(lái)，重新接種到新(xīn)的培(péi)養(yǎng)皿中(zhōng)，使細胞(bāo)重(zhòng)新獲(huò)得足夠(gòu)的營養條(tiáo)件和生長(cháng)空間的過程
。對於(yú)貼壁(bì)生(shēng)長的(dí)細(xì)胞，細胞(bāo)密(mì)度(dù)長到80%-90%時(shí)，細胞狀(zhuàng)態最好(hǎo)，此(cǐ)時可(kě)進(jìn)行細胞(bāo)傳代(dài)
。下麵讓我(wǒ)們(mén)一起來(lái)看看(kàn)貼(tiē)壁細胞傳(chuán)代(dài)的方法和注意(yì)事項吧(bā)！
 

　　一(yī)
，貼壁(bì)細(xì)胞傳(chuán)代(dài)（以(yǐ)T25瓶為例(lì)）
 

　　1.顯(xiǎn)微(wēi)鏡下(xià)觀(guān)察(chá)細胞(bāo)匯合度(dù)大於(yú)80%即可(kě)傳代；
 

　　2.將(jiāng)移(yí)液(yè)管(guǎn)
，移液槍(qiāng)
，T25培(péi)養瓶
，1ml槍(qiāng)頭(tóu)
，PBS溶液(yè)等放(fàng)入超淨工作台，紫(zǐ)外燈(dēng)滅(miè)菌30min後再通風30min；
 

　　3.培養基放置(zhì)37℃水浴鍋預熱(rè)；
 

　　4.將(jiāng)胰酶和(hé)培養(yǎng)基用(yòng)75%酒(jiǔ)精(jīng)消毒後(hòu)放入超(chāo)淨工作台(tái)；
 

　　5.在培(péi)養箱內旋緊(jǐn)培養瓶瓶蓋(gài)，拿(ná)出(chū)細胞，用75%酒精消毒(dú)後放入(rù)超(chāo)淨工作台；
 

　　6.吸棄(qì)上清液(yè)；
 

　　7.用(yòng)5mlPBS液(yè)潤(rùn)洗細胞，吸棄PBS；
 

　　8.培養(yǎng)瓶(píng)加入1ml胰酶，輕(qīng)輕晃動(dòng)使胰酶充分覆蓋(gài)細(xì)胞(bāo)層，放入培(péi)養(yǎng)箱(xiāng)中孵(fū)育(yù)；
 

　　9.在顯微鏡(jìng)下觀察細(xì)胞(bāo)解離(lí)狀況，細胞(bāo)明顯變(biàn)圓(yuán)
，細(xì)胞間隙(xì)增(zēng)大，輕輕(qīng)晃(huǎng)動可呈(chéng)現(xiàn)流沙(shā)狀即(jí)可終止；
 

　　10.加入(rù)4ml培養基(jī)終止(zhǐ)消化，吹(chuī)打(dǎ)細胞層表麵數(shù)次，使其分散(sàn)成單個細胞；
 

　　11.收集細胞懸液(yè)到50ml離心(xīn)管中(zhōng)，1000-1200r/min離心(xīn)，3-5min去(qù)除(chú)胰酶(méi)；
 

　　12.離(lí)心管用75%酒精消毒後放入(rù)超淨(jìng)工(gōng)作(zuò)台，吸棄(qì)上(shàng)清液(yè)，用新(xīn)鮮培(péi)養(yǎng)基(jī)重懸(xuán)細胞(bāo)；
 

　　13.將細(xì)胞懸液按推(tuī)薦傳(chuán)代(dài)比(bǐ)例分裝到培(péi)養瓶，補(bǔ)充(chōng)適(shì)量培(péi)養基(jī)，搖晃(huǎng)使細胞分布均匀，並做(zuò)好(hǎo)標記(jì)；
 

　　14.在(zài)顯(xiǎn)微鏡下(xià)觀(guān)察細胞密度及狀態，把細(xì)胞放(fàng)回(huí)培(péi)養(yǎng)箱，旋(xuán)鬆瓶(píng)蓋(gài)以便(biàn)進(jìn)行氣體交換
。
 

　　二
，注(zhù)意(yì)事(shì)項：
 

　　1.PBS潤洗細胞(bāo)時，從與(yǔ)貼壁(bì)細胞層相對(duì)的容(róng)器(qì)一側輕輕加(jiā)入(rù)PBS，避免衝刷到細胞(bāo)層；
 

　　2.不同細(xì)胞的(dí)胰酶所需(xū)消(xiāo)化(huà)時(shí)間不一(yī)樣(yàng)，消化(huà)時(shí)間(jiān)根(gēn)據細胞(bāo)貼(tiē)壁特性而定，可每30s觀察一(yī)次
。
 

　　更(gēng)多(duō)有(yǒu)關貼(tiē)壁細(xì)胞(bāo)傳代的(dí)方(fāng)法(fǎ)和注意(yì)事項，請聯(lián)係天津(jīn)益元(yuán)利康(kāng)生物科技有限公(gōng)司！