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一,PEG是什麼(mó)?
PEG,聚乙二(èr)醇是一種(zhǒng)高(gāo)分子(zǐ)聚合物,無刺(cì)激性,味(wèi)微(wēi)苦,具有(yǒu)良好的水溶性(xìng),並與許(xǔ)多(duō)有機物(wù)組分有(yǒu)良好(hǎo)的相溶(róng)性(xìng)。具有(yǒu)優(yōu)良的潤(rùn)滑性,保(bǎo)濕性,分散(sàn)性(xìng),粘(nián)接(jiē)性,可作(zuò)為(wéi)抗靜電劑(jì)及柔軟(ruǎn)劑等(děng)使用,在化(huà)妝(zhuāng)品,製藥,化纖,橡(xiàng)膠(jiāo),塑(sù)料(liào),造紙,油漆,電(diàn)鍍,農藥,金屬加工(gōng)及食品加(jiā)工(gōng)等(děng)行(háng)業中均(jūn)有(yǒu)極(jí)為(wéi)廣(guǎng)泛(fàn)的應用。其(qí)分(fēn)子式(shì)為HO(CH2CH2O)nH,其中(zhōng)n代(dài)表(biǎo)聚合度,決定了PEG的(dí)分(fēn)子量。PEG具(jù)有良好的(dí)水溶(róng)性,無(wú)毒性(xìng),生物(wù)相容(róng)性和化學穩(wěn)定(dìng)性(xìng),這(zhè)些特性使(shǐ)得(dé)PEG在(zài)生(shēng)物醫學領域得(dé)到了廣泛(fàn)應用。
二(èr),PEG在核酸提取(qǔ)中(zhōng)的(dí)作用機(jī)製
1,促(cù)進(jìn)核酸凝(níng)聚
PEG在核酸提取中(zhōng)的(dí)主要作(zuò)用之(zhī)一是促進(jìn)核酸的凝聚(jù)。在(zài)高鹽(yán)濃(nóng)度(如NaCl)存在(zài)下,PEG能夠(gòu)與(yǔ)核酸分(fēn)子相互(hù)作(zuò)用,使(shǐ)核酸從水化(huà)的(dí)綫狀(zhuàng)構象(xiàng)轉變為(wéi)緊(jǐn)湊的球狀(zhuàng)構(gòu)象(xiàng)。這種構(gòu)象(xiàng)轉變暴露(lòu)出核(hé)酸(suān)分子表(biǎo)麵(miàn)的負(fù)電荷磷(lín)酸基團,增(zēng)加(jiā)了核酸分子之間的靜電相互作用(yòng),從而(ér)促(cù)進核酸(suān)的凝(níng)聚和(hé)沉澱。
2,增強核酸(suān)與固相載體的(dí)結合
在核(hé)酸提取過(guò)程中,常(cháng)常使用(yòng)磁珠,矽(guī)膠等固(gù)相載體來吸(xī)附(fù)和(hé)純化(huà)核(hé)酸(suān)。PEG的加入能夠(gòu)增強核酸(suān)分(fēn)子與固相載(zǎi)體之(zhī)間的結(jié)合力(lì)。具體來說,PEG能(néng)夠通(tōng)過(guò)與核酸(suān)分子(zǐ)表麵的(dí)負電荷(hé)磷(lín)酸基團(tuán)和(hé)固相(xiāng)載體(tǐ)表(biǎo)麵的正電(diàn)荷基(jī)團(tuán)(如氨(ān)基(jī))形(xíng)成(chéng)離子橋,從而牢固地(dì)將(jiāng)核酸分(fēn)子(zǐ)吸(xī)附(fù)在(zài)固(gù)相載(zǎi)體上。
3,減(jiǎn)少(shǎo)非(fēi)特異(yì)性(xìng)吸附(fù)
在核(hé)酸提取過程中,除(chú)了目標核酸(suān)分子外,還常常存(cún)在(zài)許多非(fēi)特異性成(chéng)分(fēn)(如蛋(dàn)白質,多(duō)糖等(děng))。這些(xiē)非特異性(xìng)成分可能(néng)會(huì)與(yǔ)固(gù)相(xiāng)載體(tǐ)結(jié)合,影響(xiǎng)核酸(suān)的純化效果。PEG的加入能(néng)夠在一定程(chéng)度(dù)上(shàng)減(jiǎn)少這些(xiē)非特異性(xìng)成分(fēn)與固相載體(tǐ)的結合(hé),提高核(hé)酸提取(qǔ)的純度。
4,沉澱(diàn)雜質
PEG還能夠(gòu)在核(hé)酸(suān)提取過程(chéng)中(zhōng)沉澱一(yī)些雜質成分,如細胞碎片(piàn),蛋白質(zhì)等(děng)。這(zhè)些(xiē)雜(zá)質成(chéng)分(fēn)如果存在於核酸提(tí)取(qǔ)物中,會對後(hòu)續的(dí)分子生(shēng)物學實驗產生幹擾(rǎo)。PEG通(tōng)過形成高分子(zǐ)凝膠(jiāo)狀物質,將雜質成分(fēn)包裹並沉澱下(xià)來,從(cóng)而淨化(huà)核酸提取物。
三,PEG在(zài)核酸(suān)提(tí)取中(zhōng)的(dí)具(jù)體(tǐ)應用
1,基於(yú)磁珠的(dí)核酸提(tí)取(qǔ)
在(zài)基(jī)於磁珠的核酸(suān)提取方法中,PEG常(cháng)作為重(zhòng)要的輔助試(shì)劑(jì)。具(jù)體步驟(zhòu)包(bāo)括:首先,將待提(tí)取的(dí)樣(yàng)本(如血液,組織等)裂(liè)解,釋(shì)放出(chū)核酸(suān)分子;然後(hòu),加(jiā)入(rù)PEG和(hé)高鹽溶(róng)液(yè),使核酸(suān)分(fēn)子凝聚(jù)並暴露出負(fù)電(diàn)荷磷(lín)酸(suān)基團;接著,加入帶有正電荷(hé)基(jī)團(tuán)的磁珠,通過(guò)離子(zǐ)橋(qiáo)作用將核酸分(fēn)子(zǐ)吸(xī)附在磁(cí)珠上;最後,通過(guò)磁場(cháng)作(zuò)用將磁珠與(yǔ)溶液分離,洗滌(dí)磁(cí)珠以(yǐ)去除(chú)雜質(zhì)成分(fēn),最(zuì)後洗(xǐ)脫磁珠上(shàng)的(dí)核酸分子。
2,無醇清(qīng)洗液中的(dí)應(yīng)用
在一些無(wú)醇清洗液(yè)中,PEG也作為重要的成分之一(yī)。這些清洗(xǐ)液主(zhǔ)要用(yòng)於去(qù)除(chú)核(hé)酸提取過(guò)程(chéng)中(zhōng)的乙(yǐ)醇殘留(liú)和其他(tā)雜(zá)質(zhì)成分。PEG通(tōng)過(guò)沉(chén)澱作用將雜質成分去除(chú),同(tóng)時避免了乙醇(chún)殘留(liú)對下(xià)遊(yóu)實驗的影響。這種無(wú)醇(chún)清(qīng)洗(xǐ)液在xinguan病毒(dú)等病原(yuán)體的核酸(suān)提取(qǔ)中(zhōng)得(dé)到了(liǎo)廣泛應用。
3,片(piàn)段化DNA的篩(shāi)選
在下(xià)一代(dài)測(cè)序(xù)(NGS)等高(gāo)通(tōng)量(liáng)測序技術(shù)中(zhōng),需要從(cóng)樣(yàng)本(běn)中提(tí)取特(tè)定(dìng)大小的(dí)DNA片段。PEG可以通過(guò)調(tiáo)節(jié)其(qí)濃度和反(fǎn)應(yīng)條(tiáo)件(jiàn),實現對不同大(dà)小(xiǎo)DNA片(piàn)段(duàn)的(dí)選(xuǎn)擇性吸(xī)附(fù)和(hé)純化。具體來說(shuō),通(tōng)過(guò)兩輪(lún)或(huò)多(duō)輪吸(xī)附過(guò)程,可(kě)以逐步(bù)去(qù)除較小或較(jiào)大的(dí)DNA片段,最終得(dé)到符(fú)合要(yào)求的特定大(dà)小DNA片(piàn)段。
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