細胞如若(ruò)在生長(cháng)過(guò)程(chéng)中遇到(dào)漂(piāo)浮困(kùn)境，你有沒(méi)有想過會是(shì)操(cāo)作不(bù)當？！接(jiē)下來(lái)，跟(gēn)隨(suí)康(kāng)康一起，探(tàn)討這個非(fēi)微生物原(yuán)因導致(zhì)的(dí)細胞(bāo)培(péi)養(yǎng)問題，並找(zhǎo)到(dào)讓它(tā)正常發展(zhǎn)的解(jiě)決方(fāng)案(àn)。

復(fù)蘇(sū)後(hòu)細胞(bāo)漂(piāo)浮原因(yīn)一(yī)：細(xì)胞(bāo)本身貼壁能力較弱

比如(rú)細(xì)胞轉染的(dí)明星細(xì)胞293T，它生長(cháng)較(jiào)快(kuài)，但貼壁能力弱(ruò)，容易出現(xiàn)明(míng)顯的(dí)成片脫(tuō)落(là)現象。

293細胞

∝解(jiě)決辦法(fǎ)：提(tí)前使用明膠包被板(bǎn)子，增(zēng)強吸附(fù)性。另外(wài)，還建議使用(yòng)TC處(chǔ)理（tissue culture treated）的(dí)培養瓶/皿促進(jìn)細胞貼壁附(fù)著(zhuó)。

復蘇(sū)後(hòu)細(xì)胞(bāo)漂浮原因(yīn)二：培養(yǎng)基選(xuǎn)擇(zé)錯誤(wù)

比如(rú)293T細(xì)胞(bāo)培(péi)養，推薦(jiàn)使用的培養基為DMEM（高糖(táng)）+10%FBS，但是如(rú)果使用(yòng)RPMI-1640+10%FBS做為(wéi)培養基，培養液糖(táng)分不(bù)足，故(gù)不夠支持(chí)細胞(bāo)生(shēng)長(cháng)所(suǒ)需。雖然(rán)用(yòng)錯了培(péi)養(yǎng)基，但這不代表細(xì)胞一定(dìng)不能生長。但如(rú)果(guǒ)培養細(xì)胞中長時(shí)間使用(yòng)不(bù)正(zhèng)確的(dí)培(péi)養(yǎng)基(jī)，甚至(zhì)缺少必要營(yíng)養組分（例如(rú)優(yōu)質(zhì)的血清），那(nà)細(xì)胞(bāo)真(zhēn)的就漂(piāo)了。

∝解(jiě)決辦(bàn)法(fǎ)：參照細(xì)胞使用說(shuō)明書或(huò)者(zhě)實(shí)驗室預實驗結果，使用(yòng)合適(shì)的(dí)培養體係(xì)。對於(yú)間(jiān)充(chōng)質幹細(xì)胞(bāo)這(zhè)類生(shēng)存條件苛(kē)刻的(dí)細(xì)胞，培養(yǎng)基(jī)和(hé)血清(qīng)的質量(liáng)要(yào)求(qiú)會(huì)更高(gāo)。

復蘇後細(xì)胞漂(piāo)浮原因三：復(fù)蘇(sū)過(guò)程(chéng)中(zhōng)操(cāo)作不當

復蘇(sū)過(guò)程水溫太低，解(jiě)凍(dòng)時間(jiān)不足，冰晶損傷了細(xì)胞；水溫太高，燙(tàng)傷了細(xì)胞。

∝解(jiě)決(jué)辦(bàn)法：復蘇細胞過程(chéng)，一般是從液氮(dàn)罐(guàn)中(zhōng)取(qǔ)出凍(dòng)存管，立(lì)即(jí)放入到37℃水槽(cáo)中(zhōng)快(kuài)速解凍，搖(yáo)晃(huǎng)凍(dòng)存管(guǎn)，確(què)保在1分(fēn)鐘(zhōng)內完成解(jiě)凍。

復蘇後細胞漂(piāo)浮原因(yīn)四(sì)：離心對(duì)細胞(bāo)造成損(sǔn)傷(shāng)

去除(chú)凍存液(yè)中殘(cán)留的DMSO過程(chéng)，在細胞(bāo)復蘇過程中，解凍完畢(bì)之後，為了防止殘(cán)留(liú)DMSO對細胞的(dí)毒(dú)性影響(xiǎng)，很多(duō)小(xiǎo)夥伴會將(jiāng)細胞懸液轉入(rù)到(dào)15mL離心管內(nèi)，離心(xīn)去上清，再重(zhòng)懸(xuán)細胞(bāo)接(jiē)種培養。但這(zhè)種情況，會導(dǎo)致剛復蘇(sū)還(huán)極為脆(cuì)弱(ruò)的細胞，因(yīn)為(wéi)離(lí)心(xīn)機的(dí)離心(xīn)力更(gēng)為(wéi)脆弱甚至(zhì)破(pò)損(sǔn)死亡。

∝解決辦(bàn)法：

其實除(chú)了少數(shù)對(duì)DMSO敏(mǐn)感的細(xì)胞之(zhī)外（例如DMSO誘導HL-60分化成(chéng)類中性(xìng)粒細胞），絕(jué)大(dà)多數細(xì)胞(bāo)應在解凍(dòng)之後(hòu)，直接(jiē)接(jiē)種(zhǒng)在(zài)培養(yǎng)皿內，隔天再更換(huàn)新鮮(xiān)培養(yǎng)基去(qù)除DMSO。

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