一(yī)
，buffer是幹什(shí)麼(mó)的(dí)？

PCR buffer（緩(huǎn)衝液）的(dí)作用就是給(gěi)Taq酶(méi)提(tí)供一(yī)個最(zuì)適(shì)的反應條件(jiàn)
。一般含有Tris－HCL，Mgcl2+等成分
。不同(tóng)的(dí)pcr buffer成分(fēn)可能不(bù)一樣(yàng)
。

二
，buffer基本組分(fēn)

1
，Tris-HCl：具有良好的緩衝能(néng)力和對(duì)多(duō)種酶的(dí)兼容性，在(zài)PCR中(zhōng)的主要作(zuò)用是調節(jié)反應體係(xì)的pH值(zhí)，使PCR反應過程維(wéi)持(chí)在(zài)一個(gè)穩(wěn)定的ph範(fàn)圍內(nèi)；為(wéi)酶反應提(tí)供(gōng)恒(héng)定(dìng)的酸(suān)鹼(jiǎn)環境，保(bǎo)持(chí)酶的活(huó)性，確保(bǎo)PCR擴(kuò)增的(dí)順(shùn)利(lì)進(jìn)行
。

2
，K+：主要(yào)發(fā)揮穩定酶(méi)活(huó)性和參(cān)與(yǔ)模板DNA的(dí)解(jiě)鏈(liàn)作(zuò)用
。適當的(dí)鉀(jiǎ)離子濃度可以(yǐ)維持Taq酶的(dí)活(huó)性(xìng)，從而提高PCR反(fǎn)應(yīng)的效(xiào)率；結合到DNA鏈上的(dí)磷酸基(jī)團上，中(zhōng)和(hé)負電荷，減(jiǎn)弱(ruò)雙(shuāng)鏈(liàn)復性(xìng)時的負電(diàn)荷相(xiāng)斥，穩(wěn)定(dìng)引(yǐn)物(wù)-模板(bǎn)復(fù)合(hé)體
。

3
，NH4+：NH4+以銨離子和氨的(dí)形式(shì)存(cún)在，可(kě)以與鹼(jiǎn)基(jī)之(zhī)間(jiān)的氫(qīng)鍵發生相(xiāng)互(hù)作用(yòng)，使(shǐ)錯(cuò)配鹼基間(jiān)的(dí)不穩定的(dí)氫鍵容易(yì)斷(duàn)開，在退火時促(cù)進引(yǐn)物的(dí)特(tè)異性結合
。

4
，Mg2+：和dNTP結(jié)合(hé)成復合(hé)物，作為聚合酶的底物，是(shì)聚合酶的(dí)激活(huó)劑；結(jié)合(hé)到DNA鏈上的(dí)磷(lín)酸基團上(shàng)，中和負(fù)電(diàn)荷，減弱(ruò)雙(shuāng)鏈(liàn)復(fù)性時的(dí)負電荷相斥，穩定引(yǐn)物-模板復合體(tǐ)
。

三
，注(zhù)意

對於(yú) Taq DNA聚(jù)合(hé)酶，緩衝(chōng)液(yè)的一個常見成(chéng)分是(shì)來自KCl的(dí)鉀離子（K+)，其(qí)可促進引物的吸(xī)附(fù)
。有時(shí)，也(yě)可(kě)使(shǐ)用硫(liú)酸銨(ǎn)(NH4)2SO4 代(dài)替(tì)KCl
。銨(ǎn)離(lí)子(zǐ)(NH4+)具有(yǒu)去(qù)穩定(dìng)作用，尤其對於錯配(pèi)引物-模(mó)板復(fù)合物(wù)鹼基對之(zhī)間的弱氫鍵(jiàn)，因此可增強反應特異性
。

Mg2+ 濃度過(guò)低(dī)會降低(dī)聚合酶活(huó)性，導致PCR產(chǎn)物較(jiào)少或(huò)無(wú)PCR產(chǎn)物
。另一(yī)方麵(miàn)， Mg2+ 濃度過高則(zé)會(huì)提(tí)高引物-模板(bǎn)復(fù)合(hé)物的穩定(dìng)性，產(chǎn)生(shēng)非(fēi)特異性PCR產物，並(bìng)增(zēng)加(jiā)由dNTP錯誤(wù)插(chā)入導(dǎo)致(zhì)的(dí)復(fù)製錯(cuò)誤
。由於NH4+ 與Mg2+具有(yǒu)拮(jié)抗效應，因此(cǐ)，在各(gè)種 Mg2+ 濃度下(xià)，含有(yǒu)(NH4)2SO4 的(dí)緩衝液都表(biǎo)現出更高的引物特異性(xìng)
。

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