一個成功的IHC實(shí)驗(yàn)，以(yǐ)下七個(gè)環(huán)節(jié)至(zhì)關(guān)重要，如(rú)同一個精密(mì)的鏈(liàn)條，缺一不(bù)可。

免疫組化（IHC）核(hé)心技術(shù)要點(diǎn)一：樣(yàng)本(běn)製備(bèi) - 基(jī)石

組(zǔ)織固定：

要(yào)點(diǎn)： 及(jí)時，充分，適度(dù)。離體(tǐ)組(zǔ)織應盡快（通常30分(fēn)鐘內）放(fàng)入(rù)足量（10-20倍體積）的10%中(zhōng)性(xìng)福(fú)爾(ěr)馬(mǎ)林(lín)緩(huǎn)衝(chōng)液(yè)中。

目的(dí)： 保(bǎo)存抗原(yuán)性，防止(zhǐ)降(jiàng)解(jiě)和(hé)彌散(sàn)。固定(dìng)不(bù)足會(huì)導(dǎo)致抗(kàng)原丟(diū)失；固(gù)定(dìng)過度會(huì)遮蔽抗原表位，導致後續(xù)抗(kàng)原修(xiū)復困難。

石(shí)蠟包埋(mái)與切(qiē)片(piàn)：

要點： 組織(zhī)脫(tuō)水(shuǐ)，透明，浸蠟過程要(yào)ce底但(dàn)不(bù)過(guò)度。切(qiē)片(piàn)厚(hòu)度通常為3-5μm，要求平(píng)整，無褶皺，無裂痕。

目的： 獲得(dé)高(gāo)質(zhì)量的(dí)組織(zhī)切片，為後續染(rǎn)色提(tí)供基礎。

免疫(yì)組化(huà)（IHC）核(hé)心技術要點二：抗原(yuán)修復 - 關鍵(jiàn)步驟(zhòu)

為什(shí)麼需要： 福(fú)爾馬林(lín)固定會使蛋(dàn)白質交聯(lián)，遮(zhē)蔽(bì)抗(kàng)原(yuán)表位。抗(kàng)原修復的(dí)目(mù)的是打破(pò)這(zhè)些(xiē)交聯，使抗(kàng)原重(zhòng)新暴露。

主要方(fāng)法(fǎ)：

熱誘導(dǎo)表(biǎo)位修復（HIER）： zui常用。使用檸(níng)檬(méng)酸鹽(yán)（pH 6.0）或EDTA/EGTA（pH 8.0-9.0）緩衝液，在(zài)微波(bō)爐，高壓(yā)鍋(guō)或水浴鍋中(zhōng)加熱(rè)。pH值的選擇(zé)對(duì)某(mǒu)些抗體至(zhì)關重(zhòng)要。

酶消化修(xiū)復： 使用(yòng)胰蛋(dàn)白(bái)酶(méi)，胃蛋白酶等。適用(yòng)於(yú)部(bù)分(fēn)固(gù)定過度或特(tè)定抗原(yuán)。

要點： 根據(jù)目標抗原(yuán)和(hé)一抗說明(míng)書(shū)，優(yōu)化(huà)修復方法(fǎ)和pH值。修復後需自(zì)然冷(lěng)卻，避(bì)免驟冷。

免疫(yì)組(zǔ)化(huà)（IHC）核心技術(shù)要點(diǎn)三(sān)： 內源(yuán)性過氧化物(wù)酶(méi)阻斷(duàn)

要(yào)點： 在加(jiā)入一抗(kàng)前，用3% H₂O₂溶液處理切片，孵育10-15分(fēn)鐘。

目的： 阻(zǔ)斷(duàn)組(zǔ)織內源(yuán)性的過氧化物酶(méi)（尤其(qí)在紅(hóng)細胞(bāo)，粒細(xì)胞(bāo)中(zhōng)），防(fáng)止(zhǐ)在後續(xù)DAB顯(xiǎn)色時產生非特(tè)異(yì)性(xìng)背(bèi)景著色(sè)。

免疫組化（IHC）核心技術要(yào)點四：封(fēng)閉

要點(diǎn)： 使(shǐ)用與二抗來源(yuán)同種的正常血清（如，二抗是山(shān)羊(yáng)抗兔(tù)，則(zé)用正(zhèng)常山(shān)羊血清(qīng)）或BSA（牛血清白蛋(dàn)白），室溫(wēn)封(fēng)閉20-30分(fēn)鐘。

目的： 封閉組(zǔ)織(zhī)切(qiē)片(piàn)上非(fēi)特(tè)異性(xìng)的蛋(dàn)白質(zhì)結合位點，減少一抗(kàng)，二抗的(dí)非(fēi)特(tè)異性吸附，降(jiàng)低(dī)背景(jǐng)。

免疫組(zǔ)化（IHC）核(hé)心(xīn)技(jì)術要點五：抗體孵育- 核(hé)心反應

一抗(kàng)孵育(yù)：

要點： 抗(kàng)體濃(nóng)度，孵育(yù)時(shí)間和(hé)溫度是三大關鍵變(biàn)量。必須參(cān)照說明書並進行預(yù)實驗優化。孵育通(tōng)常(cháng)在4°C過夜（特異性(xìng)好(hǎo)）或(huò)室溫1-2小時（快速(sù)）。

目的： 特異(yì)性識(shí)別並結合目標(biāo)抗(kàng)原。

二(èr)抗(kàng)孵(fū)育：

要(yào)點(diǎn)： 二(èr)抗(kàng)需與(yǔ)一抗的(dí)種屬和(hé)亞(yà)型(xíng)匹(pǐ)配。通(tōng)常室(shì)溫孵(fū)育30-60分鐘。

目(mù)的(dí)： 攜帶(dài)標(biāo)記物（如酶(méi)HRP或熒(yíng)光(guāng)基(jī)團(tuán)）與一抗(kàng)結合，起放(fàng)大(dà)信號(hào)的(dí)作用。

免(miǎn)疫(yì)組化(huà)（IHC）核心(xīn)技術要(yào)點六：顯(xiǎn)色(sè)

要(yào)點(diǎn)： zui常用的(dí)是DAB（二氨(ān)基(jī)聯(lián)苯(běn)胺(àn)） 顯(xiǎn)色(sè)。DAB在(zài)HRP催化(huà)下產生棕(zōng)褐色(sè)不(bù)溶性(xìng)沉澱(diàn)。

關鍵(jiàn)： 鏡(jìng)下控(kòng)製顯色(sè)時間(jiān)！ 通常在顯(xiǎn)微(wēi)鏡(jìng)下觀察，待(dài)特(tè)異(yì)性(xìng)信號清晰而背(bèi)景(jǐng)未(wèi)著色時立即(jí)終止反應（一般(bān)幾(jī)十秒(miǎo)到幾分鐘）。時間過(guò)短(duǎn)則(zé)信號(hào)弱，過長則(zé)背(bèi)景(jǐng)深(shēn)。

其他： AEC（紅色）等，但產物溶於有(yǒu)機溶劑(jì)，需水(shuǐ)性封片劑封片。

免疫組(zǔ)化(huà)（IHC）核(hé)心(xīn)技(jì)術(shù)要(yào)點(diǎn)七(qī)：復染(rǎn)，脫(tuō)水，封(fēng)片

復(fù)染： 常用(yòng)蘇木精（Hematoxylin） 對細胞(bāo)核進行藍色復染(rǎn)，提供(gōng)組(zǔ)織(zhī)形態學(xué)對照(zhào)。

脫(tuō)水透(tòu)明(míng)： 經酒精梯度脫水，二甲(jiǎ)苯透(tòu)明，使組(zǔ)織(zhī)透亮。

封(fēng)片(piàn)： 使(shǐ)用中性(xìng)樹(shù)膠(jiāo)封片，長期保存(cún)。

天津益元利康生(shēng)物(wù)科技(jì)有限(xiàn)公(gōng)司，提(tí)供(gōng)實(shí)驗中(zhōng)所需(xū)抗體(tǐ)，緩衝液(yè)等。

一，輻(fú)射(shè)五(wǔ)大服務方(fāng)向：

1.國(guó)內試劑耗(hào)材經銷(xiāo)代理；

2.國外(wài)試(shì)劑訂(dìng)購(gòu)（直(zhí)訂，或境外(wài)代理）；

3.基(jī)因(yīn)組(zǔ)測(cè)序（二代(dài)，二(èr)代(dài)+三(sān)代）；

4.基(jī)因分型(xíng)（SNP檢測）：低(dī)/中/中 高(gāo)通量項目；

5.生(shēng)物樣(yàng)本運輸(shū)（國內，）；

二，多家(jiā)代理品牌，涉(shè)及30多種，經(jīng)營(yíng)代(dài)理500多個(gè)品牌：

Qiagen，Sigma，R&D，Epigentek，ThermoFisher，DNA Genotek，USA Scientific，origene，

Matreya，Sage Science，List Labs，Macrocyclics，Steraloids，

NIBSC，mobio，immunodx，cellsystems，medicago，abcam

CST，Roche，Bethyl，sino Biological，clodrosome，adi

BIO-WORLD，TOKU-E，HYPHEN BioMed，moltox，ZeptoMetrix

International Humic，biocytex，Toxin Technology  ，Streck

Elastin，biomax，Orflo Technologies，Accegen，Advbiomart，genlantis，coaChrom

ZYMO，Cygnus Technologies LLC，Enzyme Research，Bio/Data Corporation

Greer Lab ，Solarbio，bangslabs，bioline，musechem，Novocastra

stemrd，hyphen-biomed，polyplus，moltox ，exiqon，pentapharm，verichemlabs

GenStar，ALZET，lucernatechnologies ，meridian，origene，zimmerpeacocktech

horizondiscovery，Reagents，megazyme，elisasystems………

所有生(shēng)物試劑耗(hào)材都可以(yǐ)進(jìn)口，特別是(shì)冷(lěng)門品(pǐn)牌，均能給客戶(hù)購買到(dào)。價格(gé)優(yōu)，貨期短，可(kě)加急(jí)，較快10天(tiān)到貨(huò)；保(bǎo)證服務(wù)質量(liáng)，所(suǒ)有(yǒu)產(chǎn)品均提(tí)供(gōng)售(shòu)後服務。大部分客戶(hù)我們提(tí)供貨到付款服務(wù)，

公(gōng)司自成(chéng)立依(yī)靠過(guò)硬的服(fú)務(wù)和(hé)良好的(dí)信譽(yù)與(yǔ)各(gè)大企事業單位(wèi)，科(kē)研單位建(jiàn)立長(cháng)期(qī)合(hé)作。客戶(hù)包括北(běi)大，清華，地大，中科院各(gè)所(suǒ)，各大藥企等(děng)等。

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