在(zài)細胞生物學(xué)實驗中(zhōng)，血清(qīng)的質量(liáng)直接(jiē)決(jué)定了細(xì)胞(bāo)的生(shēng)長(cháng)狀態，增(zēng)殖(zhí)速(sù)率以(yǐ)及實(shí)驗(yàn)結果(guǒ)的穩(wěn)定(dìng)性。Gibco 胎牛血清(qīng)（Fetal Bovine Serum, FBS）以(yǐ)其(qí)批(pī)次(cì)一致性和(hé)低內毒素含量(liáng)，廣泛(fàn)應用於(yú)各類(lèi)細胞培(péi)養(yǎng)體(tǐ)係。然(rán)而(ér)，即使擁有高品質(zhì)的血(xiě)清(qīng)，如果(guǒ)缺(quē)乏(fá)規範(fàn)的操作流程(chéng)，仍可(kě)能導(dǎo)致(zhì)營(yíng)養流(liú)失，汙(wū)染或沉澱增多(duō)。本文製(zhì)定了一份(fèn)詳盡(jìn)的 使用(yòng) SOP（標準操作規程(chéng)），旨(zhǐ)在指導科研(yán)人員(yuán)從解(jiě)凍(dòng)，分裝到儲存的每(měi)一個(gè)環(huán)節(jié)，確保(bǎo)血(xiě)清(qīng)中(zhōng)的(dí)生長(cháng)因子(zǐ)和活性(xìng)成(chéng)分(fēn)得(dé)到最(zuì)da程(chéng)度的保(bǎo)留(liú)。

一(yī)， 目的(dí)與適用範圍

目(mù)的： 規(guī)範(fàn)實(shí)驗(yàn)室內部(bù) Gibco 胎牛血清 的處(chǔ)理及(jí)使用方法，防(fáng)止因操(cāo)作(zuò)不(bù)當引(yǐn)起的血(xiě)清(qīng)變性(xìng)，微生(shēng)物汙染(rǎn)及反復凍(dòng)融(róng)導致的(dí)活性(xìng)降低。

適用(yòng)範圍： 適(shì)用於所(suǒ)有使用 Gibco 品牌胎牛血清進行哺乳(rǔ)動物細(xì)胞培(péi)養(yǎng)，雜交瘤細(xì)胞(bāo)培(péi)養及(jí)幹(gān)細胞維持的實(shí)驗人員(yuán)。

二(èr)， 實驗(yàn)前(qián)準備

器材準(zhǔn)備(bèi)：

70% 乙(yǐ)醇(chún)噴(pēn)霧(wù)瓶。

無菌血(xiě)清(qīng)分(fēn)裝瓶（推薦(jiàn)使(shǐ)用聚丙(bǐng)烯或聚(jù)碳酸(suān)酯(zhǐ)材(cái)質(zhì)的(dí)一次性無(wú)菌(jūn)瓶）。

菌(jūn)移(yí)液管及移液器(qì)。

2-8°C 冰(bīng)箱(xiāng)及 -20°C（或(huò)更低(dī)）低溫冰箱。

環(huán)境準(zhǔn)備：

所(suǒ)有涉及(jí)開蓋的(dí)操作必(bì)須在 II 級(jí)生(shēng)物安全櫃（A2 型(xíng)）內進行。

操作前開啟紫外(wài)燈照(zhào)射(shè) 30 分鐘，並開(kāi)啟(qǐ)風機(jī)運(yùn)行 10-15 分鐘以淨化(huà)氣流(liú)。

三， 解凍(dòng)操(cāo)作（關(guān)鍵步驟）

解凍(dòng)是(shì) Gibco 胎(tāi)牛(niú)血(xiě)清(qīng) 處(chǔ)理中最(zuì)關(guān)鍵的環(huán)節。不(bù)當(dāng)的解凍方式（如高(gāo)溫(wēn)快速解(jiě)凍(dòng)）會(huì)導致(zhì)血清(qīng)中產生大量蛋白沉(chén)澱(diàn)，且(qiě)不(bù)可(kě)逆地破壞熱敏性(xìng)生長因子(zǐ)。

推薦方法： 2-8°C 緩慢過夜(yè)解凍法(fǎ)。

將(jiāng)凍存的(dí) Gibco 胎(tāi)牛(niú)血(xiě)清(qīng) 從(cóng) -20°C 冰箱取出。

檢查瓶(píng)蓋(gài)是(shì)否(fǒu)擰(níng)緊(jǐn)，用 70% 乙(yǐ)醇擦拭(shì)瓶身外(wài)部消(xiāo)毒。

將(jiāng)血(xiě)清瓶置於 2-8°C 冰(bīng)箱中，使其(qí)緩(huǎn)慢融化(huà)。通(tōng)常 100mL 血清需(xū)要過(guò)夜(yè)（約(yuē) 12-16 小時(shí)）。

優(yōu)點(diǎn)： 此方法(fǎ)能(néng)最da程度(dù)減(jiǎn)少蛋白沉(chén)澱(diàn)和絮狀(zhuàng)物(wù)的(dí)生(shēng)成。

應急方法(fǎ)： 室(shì)溫 / 低溫(wēn)水浴振(zhèn)蕩法(fǎ)（僅時(shí)間緊急時使用）。

將血清瓶置(zhì)於室(shì)溫（20-25°C）水浴中(zhōng)。

頻繁(fán)且輕柔地(dì)搖晃瓶子以(yǐ)加速(sù)熱(rè)傳(chuán)遞。

嚴禁(jīn)將(jiāng)血清置(zhì)於(yú) 37°C 水浴中解凍，高(gāo)溫會導致(zhì)蛋(dàn)白質(zhì)變(biàn)性。

注意(yì)：即使使用(yòng)此方法，也(yě)應(yīng)在血(xiě)清(qīng)wan全融(róng)化(huà)前(qián)盡(jìn)快(kuài)移入冰箱(xiāng)降溫。

四， 滅(miè)活(huó)處(chǔ)理（視需(xū)求(qiú)而(ér)定(dìng)）

Gibco 出(chū)廠(chǎng)的 Gibco 胎(tāi)牛血(xiě)清(qīng) 通常已經過(guò)嚴(yán)格(gé)的質量控製，大(dà)多數情況(kuàng)下 不需(xū)要 進(jìn)行熱(rè)滅(miè)活。熱滅(miè)活(huó)會(huì)導(dǎo)致(zhì)補(bǔ)體(tǐ)失活(huó)，但(dàn)同時也(yě)可能破壞血清中的其他(tā)營(yíng)養成分（如(rú)氨(ān)基(jī)酸，維(wéi)生素）並增(zēng)加沉(chén)澱(diàn)風險。

若必須(xū)滅(miè)活（如(rú)免疫學實(shí)驗）：

將解凍(dòng)後(hòu)的血(xiě)清置(zhì)於 56°C 水(shuǐ)浴中(zhōng)。

水浴(yù)溫度需預先(xiān)校準，確(què)保(bǎo)精(jīng)準。

持(chí)續加熱(rè) 30 分(fēn)鐘，期(qī)間每(měi)隔 10 分鐘輕(qīng)輕(qīng)搖晃混匀(yún)一次。

滅活(huó)結束後，盡(jìn)快(kuài)將(jiāng)血清(qīng)冷(lěng)卻至室溫(wēn)或 2-8°C。

五， 分(fēn)裝操作(zuò)

為了(liǎo)防止(zhǐ)反復(fù)凍(dòng)融對血(xiě)清(qīng)活性的破(pò)壞(huài)，必須進(jìn)行合(hé)理(lǐ)的分(fēn)裝。

無菌操(cāo)作：

將(jiāng)解凍（及滅活）後的(dí) Gibco 胎(tāi)牛(niú)血(xiě)清(qīng) 移(yí)入(rù)生物(wù)安(ān)全櫃。

用 70% 乙醇再次擦(cā)拭(shì)瓶(píng)身。

點燃酒(jiǔ)精(jīng)燈(dēng)（如適(shì)用），在火焰(yàn)附近(jìn)打開(kāi)瓶蓋。

分(fēn)裝量控(kòng)製：

根據日常(cháng)單次使(shǐ)用量進(jìn)行(háng)分裝。建(jiàn)議(yì)每瓶(píng)分裝(zhuāng) 10mL - 20mL，或按照(zhào)單次培(péi)養基(jī)配(pèi)製的整(zhěng)倍(bèi)數分(fēn)裝。

使用無(wú)菌(jūn)移液管將(jiāng)血(xiě)清轉移(yí)至無(wú)菌(jūn)分裝瓶中，避免產生(shēng)氣(qì)泡(pào)。

標(biāo)記：

在分裝瓶上清晰標(biāo)記(jì)：產(chǎn)品名稱（Gibco FBS），批號，解凍(dòng)日(rì)期(qī)，失(shī)效日期及操(cāo)作人(rén)姓名。

六， 儲存與使(shǐ)用(yòng)

長期(qī)儲存：

分裝(zhuāng)後(hòu)的血清應迅(xùn)速置於 -20°C（標(biāo)準(zhǔn)）或 -80°C（長期(qī)）冰(bīng)箱(xiāng)冷凍保(bǎo)存。

注意：-20°C 保存(cún)通(tōng)常(cháng)建議不(bù)超過 1 年（具體視批號(hào)報(bào)告(gào)而(ér)定）。

短期使(shǐ)用：

已解(jiě)凍並正(zhèng)在使(shǐ)用的血(xiě)清，應置(zhì)於(yú) 2-8°C 冰箱(xiāng)保存(cún)。

為防(fáng)止微生物汙染(rǎn)，已開(kāi)瓶(píng)的血清建議在 4-6 周 內(nèi)用完。若超(chāo)過此(cǐ)期(qī)限或有肉眼可見的渾濁(zhuó)，應廢(fèi)棄(qì)處(chǔ)理(lǐ)。

添加(jiā)至培養基(jī)：

通常添加(jiā)濃(nóng)度為(wéi) 5% - 20%，具(jù)體(tǐ)比(bǐ)例(lì)取決(jué)於(yú)細胞類型。

添加時應將血清加入(rù)基礎培養基中(zhōng)，並輕(qīng)輕混匀(yún)，避(bì)免劇(jù)烈漩渦(wō)震蕩(dàng)。

七(qī)， 注意事(shì)項與(yǔ)故障(zhàng)排除

關於(yú)沉(chén)澱(diàn)：

若發現 Gibco 胎(tāi)牛血清 中有(yǒu)絮狀物或沉澱(diàn)，可(kě)能(néng)是纖維(wéi)蛋白或(huò)磷(lín)酸鈣(gài)（溫(wēn)育時）。這是(shì)血(xiě)清的自(zì)然(rán)特(tè)性(xìng)，並非汙染(rǎn)。

處理(lǐ)方(fāng)法(fǎ)：可通過離(lí)心（建議(yì) 1000-2000g，10 分鐘）去除沉澱，取上清(qīng)液使用，不影(yǐng)響細胞生(shēng)長(cháng)。

關於(yú)顏色(sè)：

正常血清顏(yán)色(sè)應為澄清(qīng)透明或微(wēi)紅 / 琥珀色(sè)。若顏(yán)色變為深紅(hóng)或暗黑，可能(néng)意(yì)味(wèi)著血紅(hóng)蛋白(bái)含量過高(gāo)（溶(róng)血），需(xū)謹慎使(shǐ)用或(huò)棄(qì)用。

無(wú)菌(jūn)觀(guān)念(niàn)：

切勿(wù)將(jiāng)從細(xì)胞培養室取出(chū)的剩餘(yú)血清倒回(huí)原瓶，以防交(jiāo)叉汙染(rǎn)。

八， 總結

遵循(xún)本 Gibco 胎牛(niú)血清使用 SOP，能夠(gòu)有效規避(bì)細胞培(péi)養(yǎng)中(zhōng)常(cháng)見的(dí)汙染風(fēng)險(xiǎn)和營養流失問題。正確執(zhí)行(háng) “緩慢(màn)解凍" 和 “按需(xū)分(fēn)裝" 是保護(hù)血清活(huó)性的核心(xīn)。通(tōng)過標準化(huà)的操作，您可(kě)以(yǐ)確保(bǎo)每(měi)一滴(dī)昂貴的(dí) Gibco 胎(tāi)牛血(xiě)清 都(dū)能(néng)發揮其最(zuì)大的(dí)效能，為(wéi)您(nín)的(dí)細(xì)胞(bāo)實驗提(tí)供穩(wěn)定(dìng)，可靠的(dí)營(yíng)養支(zhī)持。

供應商信息：

天津益元(yuán)利(lì)康(kāng)生(shēng)物科技有限(xiàn)公司(sī) 是(shì) Thermo Fisher Scientific（Gibco 品牌）在(zài)中國的長期合(hé)作夥伴，為您(nín)提(tí)供原裝(zhuāng)正品的 Gibco 胎牛(niú)血(xiě)清(qīng)。無(wú)論(lùn)是關於血(xiě)清批(pī)號的選(xuǎn)擇建議(yì)，還是解(jiě)凍分裝(zhuāng)的(dí)具體(tǐ)疑問(wèn)，我們(mén)都歡(huān)迎您隨時(shí)咨(zī)詢(xún)，讓(ràng)專業(yè)的(dí)服(fú)務助力您(nín)的(dí)每一次細胞培養實驗(yàn)。歡迎(yíng)聯(lián)係(xì)我們獲取產(chǎn)品樣(yàng)本或(huò)技術(shù)手(shǒu)冊。