一(yī)
， 實驗前準(zhǔn)備

1. 器(qì)材準備： 準(zhǔn)備無菌的(dí)手(shǒu)術刀(dāo)
   ，手(shǒu)術剪
   ，鑷子
   ，50mL 或 15mL 圓(yuán)錐底(dǐ)離心管(guǎn)
   ，無菌(jūn)培養皿(mǐn)。

2. 試劑(jì)檢查(chá)： 確認 美(měi)天旎 MACS 組織儲(chǔ)存溶液 (130-100-008) 包(bāo)裝完好(hǎo)，溶液清澈(chè)透(tòu)明，無(wú)渾(hún)濁(zhuó)或沉澱。該試(shì)劑為即用型(xíng)，無需(xū)稀釋(shì)或過濾(lǜ)除(chú)菌（除非(fēi)包(bāo)裝已打開(kāi)）。

3. 環(huán)境控製(zhì)： 所(suǒ)有(yǒu)操(cāo)作步(bù)驟(zhòu)建議在(zài)生物(wù)安全櫃（超淨(jìng)台）內(nèi)進行，以維(wéi)持無(wú)菌(jūn)環境。

二
， 標(biāo)準操(cāo)作流程(chéng)（SOP）

步驟 1：組(zǔ)織(zhī)采(cǎi)集(jí)與初(chū)步清(qīng)洗(xǐ)

• 操作(zuò)要點： 輕輕晃(huǎng)動(dòng)培養(yǎng)皿(mǐn)，洗去組織(zhī)表(biǎo)麵(miàn)殘留(liú)的血液(yè)
  ，壞死碎片或汙染物(wù)。這一(yī)步(bù)對(duì)於防(fáng)止(zhǐ)細菌汙染(rǎn)和非(fēi)特(tè)異性細胞(bāo)粘(nián)附(fù)至關重要(yào)。

步驟(zhòu) 2：組織修剪(jiǎn)與(yǔ)切(qiē)塊(kuài)

• 關(guān)鍵參數： 建(jiàn)議(yì)將(jiāng)組(zǔ)織(zhī)切(qiē)成(chéng)直徑或邊(biān)長(cháng)約為 3mm - 6mm 的小塊。

• 注意(yì)事(shì)項：

• 切(qiē)勿過小： 小於(yú) 2mm 的碎塊會(huì)增加(jiā)細(xì)胞(bāo)損(sǔn)傷(shāng)的(dí)風險(xiǎn)，且邊緣細胞容易死(sǐ)亡。

• 切勿過大： 超過(guò) 1cm 的大塊會導致溶液無法滲透(tòu)到組(zǔ)織中心(xīn)，造(zào)成核心(xīn)壞(huài)死。

• 去(qù)除明(míng)顯(xiǎn)的(dí)壞死組織(zhī)
  ，鈣化點及(jí)過多(duō)的脂(zhī)肪(fáng)組織(zhī)（除非脂肪是研究(jiū)對象）。

步驟 3：浸(jìn)泡(pào)與儲存(cún)

• 體(tǐ)積(jī)配比： 建(jiàn)議(yì)按照(zhào) 1mL 比例對應 0.5g - 1g 組(zǔ)織(zhī)的比例添(tiān)加溶液。

• wan全浸沒： 確保所(suǒ)有組織(zhī)塊wan全浸沒在液(yè)麵以(yǐ)下。如(rú)有漂浮組織(zhī)，可(kě)輕(qīng)輕壓(yā)下或增加溶液量。

步驟 4：溫控與(yǔ)運(yùn)輸(shū)

• 儲(chǔ)存溫度： 立(lì)即將離(lí)心管(guǎn)置(zhì)於 2-8°C（冰箱冷藏層(céng)）環境中(zhōng)。

• 嚴禁冷(lěng)凍： 絕對(duì)不可(kě)將溶(róng)液放(fàng)入(rù) - 20°C 或 - 80°C 冷(lěng)凍，冷凍會破壞(huài)細胞滲(shèn)透壓(yā)，導(dǎo)致細胞(bāo)破(pò)裂(liè)。

• 運(yùn)輸要求： 若需異地運(yùn)輸(shū)，應使用(yòng)冷藏(cáng)箱配合冰(bīng)袋(dài)或藍(lán)冰進行(háng)冷(lěng)鏈(liàn)運(yùn)輸(shū)，確保(bǎo)全(quán)程溫度(dù)維(wéi)持在 2-8°C。避(bì)免組織直(zhí)接接(jiē)觸冰(bīng)袋(dài)，以防局部凍傷(shāng)。

步(bù)驟(zhòu) 5：後續(xù)處(chǔ)理(lǐ)（解離(lí)）

• 取出(chū)組織(zhī)： 無菌(jūn)條件(jiàn)下取(qǔ)出組織塊。

• 清洗(xǐ)（可(kě)選）： 可(kě)用(yòng)冷 PBS 衝(chōng)洗(xǐ)一次(cì)，以去除殘(cán)留的儲(chǔ)存液(yè)。

• 開始(shǐ)解(jiě)離： 立(lì)即(jí)使用美天旎 MACS 組(zǔ)織解離(lí)試劑盒及相關程序(xù)進行機械(xiè)法和(hé)酶(méi)法解離。

三(sān)
， 關鍵注意事(shì)項與技(jì)巧

1. 時(shí)間窗口管理：雖(suī)然 美(měi)天(tiān)旎(nǐ) MACS 組(zǔ)織(zhī)儲存(cún)溶(róng)液(yè) (130-100-008) 支持最長 48 小時的(dí)保(bǎo)存(cún)，但(dàn)為了(liǎo)獲得(dé)最佳細(xì)胞活(huó)力(lì)，建(jiàn)議在 24 小(xiǎo)時內 完成(chéng)解離(lí)處(chǔ)理(lǐ)。保(bǎo)存(cún)時間(jiān)越(yuè)長(cháng)，雖(suī)然活(huó)細(xì)胞(bāo)比(bǐ)例(lì)尚(shàng)可(kě)，但(dàn)某些敏感(gǎn)的細(xì)胞(bāo)亞群(qún)可能會逐漸減少。
2. 避免反復(fù)凍融(róng)：該試劑通(tōng)常為(wéi) 100mL 或(huò) 500mL 大包(bāo)裝(zhuāng)。建議(yì)根據單次(cì)使(shǐ)用(yòng)量(liáng)進(jìn)行(háng)無菌分(fēn)裝(zhuāng)，避免(miǎn)反復(fù)開(kāi)啟瓶(píng)蓋(gài)造成汙(wū)染(rǎn)。分裝後(hòu)的(dí)試劑在 2-8°C 密封保存，有效期可達數(shù)月（具(jù)體請參照瓶(píng)標(biāo)簽）。
3. 兼容(róng)性(xìng)說(shuō)明(míng)：該溶(róng)液(yè)專(zhuān)為(wéi)保存未處(chǔ)理(lǐ)的新鮮(xiān)組織設(shè)計。切勿(wù)將(jiāng)已經製備(bèi)好的單(dān)細胞懸(xuán)液(yè)重(zhòng)懸於該溶液中長(cháng)期保存，單細胞應使用專用(yòng)的細(xì)胞凍存(cún)液或含血清培(péi)養(yǎng)基(jī)處理(lǐ)。
4. 抗幹(gān)擾能(néng)力：如(rú)果(guǒ)組織(zhī)樣本汙染(rǎn)嚴重（如含(hán)有大(dà)量膿(nóng)液或壞死組織(zhī)），建議先(xiān)進行更ce底的(dí)清洗，或(huò)考(kǎo)慮(lǜ)在溶液中添加(jiā)適量(liáng)的雙(shuāng)抗(kàng)（青黴素 - 鏈黴素(sù)），盡管(guǎn) MACS 組織儲(chǔ)存溶(róng)液本身具有一定的抑菌輔助作用(yòng)（通過低(dī)溫(wēn)環(huán)境(jìng)），但(dàn)並(bìng)非抗生素(sù)溶(róng)液。

四
， 常見問題解答(dá)（FAQ）

• Q: 使(shǐ)用該(gāi)溶液後(hòu)，解(jiě)離出的(dí)細胞(bāo)得率(shuài)低(dī)是(shì)什麼原因？

• A: 可(kě)能是(shì)組(zǔ)織切塊過(guò)大，導(dǎo)致(zhì)中心細(xì)胞缺(quē)氧(yǎng)死亡(wáng)；或者(zhě)保(bǎo)存時間超(chāo)過(guò)了 48 小(xiǎo)時(shí)。請(qǐng)檢查切割尺(chǐ)寸和(hé)保(bǎo)存(cún)時長。

• Q: 可以將組(zǔ)織從(cóng)該(gāi)溶液(yè)中(zhōng)取(qǔ)出後放入 - 80°C 凍存(cún)嗎(má)？

• A: 可以(yǐ)。該溶液主(zhǔ)要用於(yú)低(dī)溫(wēn)運(yùn)輸(shū)和(hé)短期暫存(cún)。如果您(nín)需(xū)要(yào)長期凍存組(zǔ)織(zhī)，可以從(cóng)該(gāi)溶液(yè)中取出組(zǔ)織(zhī)，吸幹液(yè)體後(hòu)放入專用(yòng)的組織凍存液(yè)（如(rú)含 10% DMSO 的 FBS）中程序(xù)降(jiàng)溫凍存(cún)。

• Q: 該溶液(yè)是否(fǒu)適(shì)合(hé)所有類型的組(zǔ)織？

• A: 適(shì)用於大多數(shù)實體組(zǔ)織，如(rú)腫(zhǒng)瘤
  ，皮膚
  ，肌(jī)肉(ròu)
  ，淋巴結
  ，脾髒
  ，腦(nǎo)組織等(děng)。對於(yú)全(quán)血樣本(běn)，請(qǐng)使用(yòng)專門(mén)的(dí)抗凝(níng)劑，而(ér)非組(zǔ)織儲存溶液(yè)。

五(wǔ)
， 總(zǒng)結(jié)