酶聯免(miǎn)疫(yì)吸附測定(dìng)法 (enzyme-linked immunosorbent assay)，簡稱(chēng) ELISA，是用於(yú)檢(jiǎn)測(cè)體液(yè)中(zhōng)微量物質的固相免(miǎn)疫(yì)測定(dìng)方法。它是一種(zhǒng)特殊的試(shì)劑分析(xī)方法，是在免疫(yì)酶技術(shù)( immunoenzymatic techniques ) 的(dí)基(jī)礎上(shàng)發展起(qǐ)來(lái)的一(yī)種(zhǒng)新型的(dí)免疫測定技術。那麼(mó)你知道(dào)ELISA實驗的(dí)關(guān)鍵(jiàn)點是什麼嗎
？讓我們(mén)一起來看看吧(bā)！
 

　　一，樣(yàng)本的儲存
 

　　合適(shì)的(dí)保存環境(jìng)可(kě)以(yǐ)確保生(shēng)物樣本在後續(xù)實驗和研究中(zhōng)的(dí)可靠(kào)性和穩定性(xìng)，樣本(běn)長期(qī)保存建議在-80℃保存，1-2個(gè)月內(nèi)在(zài)-20℃保(bǎo)存，開(kāi)展(zhǎn)檢測時需(xū)分裝後保(bǎo)存(cún)4℃，並(bìng)建(jiàn)議當天短(duǎn)暫保存，單(dān)次使(shǐ)用後丟棄剩餘部(bù)分。
 

　　為(wéi)避(bì)免樣本(běn)的(dí)蛋白(bái)質結(jié)構(gòu)和(hé)活性受(shòu)損(sǔn)，盡(jìn)量避免多次凍融，凍融次數(shù)對檢測結(jié)果(guǒ)的(dí)的影(yǐng)響是(shì)不容小(xiǎo)覷的(dí)。經(jīng)測試(shì)對比發(fā)現：有(yǒu)些因子凍融2到3次甚至已(yǐ)經降到非常低(dī)的含量(liáng)水(shuǐ)平(píng)，如(rú)大家(jiā)經常關注到(dào)的(dí)炎(yán)症因子IL-1β，IL-15，IL-17，CXCL8等。
 

　　二，樣本(běn)內(nèi)外(wài)源性物(wù)質(zhì)
 

　　免疫方法檢(jiǎn)測(cè)中，內源性等(děng)因素(sù)幹擾(自(zì)身抗體，異嗜性(xìng)抗體，人(rén)抗動物抗(kàng)體及其他一些(xiē)結(jié)合蛋(dàn)白等)，脂(zhī)血，交(jiāo)叉(chā)反應，一(yī)些分析前變異(yì)(標本(běn)溶(róng)血(xiě)，標(biāo)本被(bèi)細菌(jūn)汙染，標(biāo)本貯(zhù)存過(guò)久(jiǔ)，標本(běn)凝(níng)集不全和采血(xiě)管中添加(jiā)物(wù)等(děng))，基質(zhì)效應甚(shèn)至(zhì)檢測設(shè)備的(dí)不同(tóng)，均(jūn)可(kě)對檢測(cè)結(jié)果(guǒ)造成(chéng)幹擾(rǎo)，引起許(xǔ)多檢測(cè)結(jié)果(guǒ)的假性升高(gāo)或降(jiàng)低，包括(kuò)激(jī)素，各類標誌物，藥(yào)物和病原微生(shēng)物(wù)的(dí)血(xiě)清(qīng)學(xué)檢測等(děng)。
 

　　科(kē)研(yán)人員(yuán)應充分認(rèn)識免疫檢測中的(dí)各類幹(gān)擾因(yīn)素，在出現結果不(bù)符(fú)(包(bāo)括檢測結(jié)果與(yǔ)臨床(chuáng)症狀不(bù)符，檢測(cè)預(yù)期(qī)與文(wén)獻(xiàn)不符)時進行原因分(fēn)析，如檢測的(dí)樣本(běn)類(lèi)型(xíng)是(shì)否(fǒu)與所選試劑(jì)盒匹配。
 

　　三，樣本造(zào)模
 

　　生物(wù)學實驗中影響造模(mó)成功的因素(sù)很(hěn)多，需要綜合考(kǎo)慮各種(zhǒng)因素(sù)，以確保模型的(dí)可(kě)靠(kào)性和準(zhǔn)確性：
 

　　設(shè)置(zhì)對(duì)照：在(zài)實驗造模(mó)中(zhōng)，設(shè)置對(duì)照(zhào)可以(yǐ)幫(bāng)助(zhù)確定造(zào)模是否成功(gōng)。例(lì)如(rú)，實(shí)驗組(zǔ)和對照組(zǔ)在實(shí)驗處(chǔ)理後(hòu)表(biǎo)現(xiàn)出(chū)不同(tóng)的生理(lǐ)或生化反應(yīng)，則(zé)可以認為(wéi)造模(mó)是成(chéng)功的。此(cǐ)外(wài)，通(tōng)過對(duì)照還可以評(píng)估實驗的可(kě)靠性(xìng)，例(lì)如評估(gū)實驗結果的重復性(xìng)和穩定性。
 

　　多學(xué)科驗證(zhèng)：在生(shēng)物學(xué)實(shí)驗中，確定(dìng)造(zào)模(mó)和(hé)對照(zhào)是否(fǒu)成功需(xū)要(yào)考(kǎo)慮(lǜ)多個方麵(miàn)。如(rú)：觀察(chá)實驗(yàn)動(dòng)物病(bìng)理症狀，檢測生理(lǐ)指(zhǐ)標，檢(jiǎn)測生化指(zhǐ)標，組織病(bìng)理(lǐ)學(xué)檢查(chá)，統計學分析等(děng)；
 

　　實驗(yàn)動物：不(bù)同(tóng)種類的實驗動物對模(mó)型的反應可能不同。例(lì)如(rú)，某些(xiē)藥物在(zài)小鼠和大鼠中(zhōng)的(dí)反(fǎn)應(yīng)可(kě)能(néng)會有所不(bù)同。因此，選擇適當的實(shí)驗動物種類(lèi)對於(yú)造(zào)模成(chéng)功至(zhì)關(guān)重要。
 

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