抗體是(shì)生(shēng)命科學實(shí)驗的(dí)“基(jī)石”，但也(yě)是最容(róng)易(yì)出問題(tí)的環節之(zhī)一。踩中(zhōng)一(yī)個“雷區”，就(jiù)可(kě)能(néng)導(dǎo)致幾個月(yuè)的(dí)心(xīn)血(xiě)白(bái)費。以下(xià)為(wéi)您梳理(lǐ)了(liǎo)抗體(tǐ)使用過程中最(zuì)常見的“雷區”及避(bì)坑(kēng)指(zhǐ)南(nán)，涵(hán)蓋(gài)了從存(cún)儲到驗(yàn)證(zhèng)的(dí)全流(liú)程(chéng)。
 

　　一，抗(kàng)體(tǐ)使用(yòng)雷(léi)區一(yī)：存(cún)儲(chǔ)不當——“生死(sǐ)攸關(guān)的第(dì)一步”
 

　　錯(cuò)誤做(zuò)法(fǎ)：
 

　　將濃縮抗體長期存放在4°C(非“即(jí)用型(xíng)”抗體)。
 

　　反復凍融抗(kàng)體。
 

　　將(jiāng)分(fēn)裝(zhuāng)抗體存放在冰箱門架上(shàng)，溫度(dù)波(bō)動劇烈。
 

　　避(bì)坑(kēng)指(zhǐ)南：
 

　　遵循說(shuō)明書！絕大(dà)多數(shù)濃縮抗體必須-20°C長(cháng)期(qī)保(bǎo)存(cún)。

 

　　堅決分裝！根(gēn)據(jù)使用(yòng)頻(pín)率，將抗(kàng)體無菌分(fēn)裝成(chéng)小份(fèn)(如5-10μL/管)，避免反復凍(dòng)融。
 

　　使用(yòng)抗體存(cún)儲盒：將分裝(zhuāng)管(guǎn)放入(rù)裝(zhuāng)有(yǒu)異丙醇的-20°C專(zhuān)用抗(kàng)體(tǐ)存儲盒中，確保溫度穩(wěn)定，避免(miǎn)冰晶(jīng)形(xíng)成。
 

　　工(gōng)作液(yè)的(dí)保(bǎo)存(cún)：稀(xī)釋(shì)後的(dí)抗體(tǐ)工作(zuò)液(yè)通常不(bù)穩(wěn)定，應現(xiàn)用(yòng)現配，或(huò)在4°C短期保存(1-2周)，並加入(rù)防腐劑(jì)(如0.02%疊氮化鈉(nà)，注意：有毒(dú)且會抑製某些酶活(huó)性)。
 

　　二(èr)，抗體使用(yòng)雷(léi)區二：實驗(yàn)設計與優化(huà)不足(zú)——“盲目(mù)上(shàng)陣(zhèn)，必敗無(wú)疑”
 

　　錯誤(wù)做法：
 

　　直接使(shǐ)用說(shuō)明(míng)書推薦(jiàn)的稀釋度(dù)，不進行梯(tī)度預實驗。
 

　　不(bù)設置或設(shè)置錯誤的陽(yáng)性(xìng)/陰性(xìng)對照(zhào)。
 

　　不同實(shí)驗類(lèi)型(WB/IHC/IF/FC)使(shǐ)用(yòng)相(xiāng)同(tóng)的稀釋(shì)度。
 

　　避坑指(zhǐ)南：
 

　　必須(xū)進行抗體(tǐ)滴(dī)定(dìng)！這(zhè)是(shì)最(zuì)重要的優(yōu)化步驟(zhòu)。在您的(dí)實驗係(xì)統下(xià)，做一個(gè)梯(tī)度稀釋(shì)(如1:100,1:500,1:1000,1:2000)，找(zhǎo)到信噪比(bǐ)最高(gāo)的(dí)最(zuì)佳(jiā)稀釋度。
 

　　設(shè)立嚴謹(jǐn)的對照：
 

　　陽(yáng)性對照(zhào)：已(yǐ)知表達目標蛋(dàn)白的細(xì)胞(bāo)係或組織(zhī)。驗證實(shí)驗(yàn)體係有效。
 

　　陰性(xìng)對(duì)照：
 

　　實驗陰(yīn)性對(duì)照(至關重要！)：使用同(tóng)型(xíng)IgG或不(bù)含一(yī)抗的(dí)緩衝(chōng)液。這(zhè)是(shì)判斷(duàn)信(xìn)號特異(yì)性(xìng)的(dí)金(jīn)標(biāo)準(zhǔn)。
 

　　生物(wù)學(xué)陰(yīn)性對照：已知不表(biǎo)達目標(biāo)蛋白的細胞係(xì)或組(zǔ)織(如基因敲除細胞(bāo))。
 

　　明(míng)確(què)應(yīng)用(yòng)類型(xíng)：務(wù)必確認抗(kàng)體適(shì)用於(yú)您要(yào)做(zuò)的實(shí)驗(yàn)(WB,IHC,IF,FC等(děng))。用於WB的(dí)抗(kàng)體可能不(bù)適(shì)用(yòng)於(yú)IHC，反之亦然(rán)。
 

　　三，抗(kàng)體使用雷區(qū)三(sān)：操(cāo)作與流(liú)程(chéng)不(bù)規(guī)範——“細(xì)節(jié)決定(dìng)成(chéng)敗”
 

　　錯誤做(zuò)法：
 

　　WB轉膜不徹底或(huò)過轉。
 

　　IHC/IF中(zhōng)抗原(yuán)修復(fù)方法或(huò)條(tiáo)件錯(cuò)誤。
 

　　封閉不(bù)充分(fēn)或封(fēng)閉過度(dù)。
 

　　洗脫不充(chōng)分或過於(yú)劇烈(liè)。
 

　　避坑指(zhǐ)南(nán)：
 

　　WB：
 

　　驗(yàn)證轉(zhuǎn)膜(mó)效(xiào)率：使用(yòng)可逆的染(rǎn)液(如(rú)麗(lì)春紅(hóng)S)或考(kǎo)馬斯亮(liàng)藍染凝(níng)膠，確(què)認蛋白(bái)已(yǐ)轉至(zhì)膜上。
 

　　優化(huà)封閉(bì)：常(cháng)用(yòng)5%BSA或脫(tuō)脂牛(niú)奶，注意磷(lín)酸化蛋(dàn)白(bái)檢測(cè)需用BSA，因為牛奶中(zhōng)含(hán)有(yǒu)酪蛋(dàn)白磷(lín)酸(suān)化。
 

　　IHC/IF：
 

　　優化抗(kàng)原修(xiū)復(fù)：根據(jù)目(mù)標抗原選擇(zé)檸(níng)檬酸鹽(pH6.0)或EDTA(pH8.0-9.0)緩(huǎn)衝液，並(bìng)優(yōu)化加熱時間(jiān)/壓力。
 

　　防止切(qiē)片(piàn)幹(gān)燥：任(rèn)何(hé)時(shí)候都不要(yào)讓組織(zhī)切片(piàn)幹燥(zào)，否則會(huì)導致非特異性(xìng)背(bèi)景極(jí)高。
 

　　充分(fēn)洗滌：使用(yòng)足夠(gòu)的(dí)PBST或(huò)TBST，每次(cì)洗滌(dí)5分(fēn)鐘(zhōng)，洗3次，徹(chè)底去除未(wèi)結(jié)合(hé)的抗(kàng)體。
 

　　四(sì)，抗(kàng)體使(shǐ)用(yòng)雷區四：抗體(tǐ)本(běn)身(shēn)的質(zhì)量與(yǔ)選(xuǎn)擇--“選擇(zé)大於努(nǔ)力(lì)”
 

　　選擇(zé)可靠品(pǐn)牌： 優先選(xuǎn)擇CST, Abcam, Thermo Fisher等(děng)口碑好的品(pǐn)牌。
 

　　查閱數據(jù)： 購買前，務(wù)必在上查(chá)看(kàn)該抗體(tǐ)的應(yīng)用(yòng)數據(jù)(WB，IHC等(děng)圖片(piàn))和參考(kǎo)文(wén)獻。
 

　　利(lì)用(yòng)引(yǐn)用(yòng)文獻(xiàn)： 在PubMed上(shàng)搜索(suǒ)該抗(kàng)體的(dí)貨號(hào)，查(chá)看(kàn)其(qí)他(tā)同行在(zài)高(gāo)質量期刊(kān)中是(shì)如(rú)何使用(yòng)和(hé)驗證(zhèng)該抗(kàng)體(tǐ)的。

 

　　遵循以(yǐ)上指南，您可(kě)以極大地避免踩雷，確(què)保實(shí)驗(yàn)結果(guǒ)的(dí)可(kě)靠(kào)性，可(kě)重復性(xìng)和(hé)科學性。祝您實驗順利！
 

　　CST, Abcam, Thermo Fisher，Origene，伊萊瑞特代(dài)理(lǐ)--天(tiān)津(jīn)益元利康(kāng)有(yǒu)限公(gōng)司(sī)，提供各(gè)種抗體(tǐ)，試劑盒(hé)，細(xì)胞(bāo)，蛋白(bái)，耗(hào)材等。該公司是一家(jiā)專注(zhù)於生命(mìng)科學(xué)實(shí)驗室快(kuài)速消(xiāo)耗品(pǐn)為主(zhǔ)營方向的(dí)生命科技(jì)企(qǐ)業，提供完整(zhěng)的產品和(hé)服(fú)務(wù)體(tǐ)係(xì)，為(wéi)廣大(dà)的(dí)科研用戶提供(gōng)實(shí)驗(yàn)室(shì)一(yī)站(zhàn)式服務(wù)。益元利康(kāng)已成為多家生物(wù)品牌的(dí)代理商(shāng)，如ALZET，MedKoo，EZB，WaKo，Zymoresearch，Qiagen等，為(wéi)用(yòng)戶(hù)提供(gōng)*的(dí)產品(pǐn)，專業的咨詢(xún)，助力(lì)推動中(zhōng)國生命科(kē)學(xué)研究(jiū)快速發(fā)展。