乳腺(xiàn)癌3D類(lèi)器官(guān)培(péi)養基產(chǎn)品(pǐn)說明(míng)：乳腺癌類(lèi)器官培養基（Breast Carcinoma Organoid Medium）是(shì)一(yī)款促進乳腺癌類(lèi)器(qì)官體外(wài)形成和擴(kuò)增的(dí)培養基(jī)。該(gāi)產品為(wéi)無菌的液體混(hùn)合(hé)係統，含有維持目(mù)的(dí)細胞(bāo)生長所必需的氨基酸，維(wéi)生(shēng)素，有(yǒu)機(jī)和無機(jī)化合(hé)物和(hé)生長(cháng)因子等。該(gāi)培養基的*配方可以(yǐ)提供一個(gè)合適的(dí)細胞(bāo)所需營養環境(jìng)，選(xuǎn)擇(zé)性地促進人(rén)乳(rǔ)腺(xiàn)癌類器(qì)官(guān)的體外(wài)生(shēng)長(cháng)和擴增。

乳腺(xiàn)癌3D類器官(guān)培(péi)養基產品(pǐn)優勢：
(1) 培養成(chéng)功率高(gāo)

(2) 體外持續擴增(zēng)

(3) 保持腫瘤特征

(4) 藥(yào)敏(mǐn)結果與(yǔ)臨(lín)床(chuáng)數(shù)據接近(jìn)

使(shǐ)用說明：
◉  實驗前準(zhǔn)備(bèi)
（1）提(tí)前將24孔細胞培養板置(zhì)於(yú)37℃的培養箱中預(yù)熱過(guò)夜。
（2）將15mL無菌(jūn)離心管，1.5mLEP管，移液器(qì)，移液管，無菌槍(qiāng)頭等表(biǎo)麵(miàn)消(xiāo)毒(dú)後放入超(chāo)淨(jìng)工作台中紫外照射(shè)30 min。
（3）提(tí)前30 min從(cóng)4 ℃冰(bīng)箱(xiāng)取出(chū)乳腺癌(ái)類器(qì)官(guān)培養(yǎng)基平衡至(zhì)室溫。（4）提前(qián)從(cóng)-20℃冰箱取出(chū)所(suǒ)需(xū)體(tǐ)積(jī)的(dí)細胞(bāo)外(wài)基質膠冰上(shàng)融化。（5）配置含(hán)1%BSA的(dí)DMEM培養基冰上(shàng)預冷備用(yòng)。
◉  乳(rǔ)腺癌類器官培養(yǎng)
（1）將取自(zì)乳(rǔ)腺(xiàn)癌患(huàn)者的樣(yàng)本進(jìn)行分離和(hé)消化(huà)，消(xiāo)化後(hòu)的(dí)細胞懸液進(jìn)行(háng)計數(shù)。
（2）按每(měi)孔1~2×10*個細(xì)胞密度計(jì)算所(suǒ)需細(xì)胞(bāo)數(shù)，根(gēn)據(jù)計算(suàn)好(hǎo)的(dí)體(tǐ)積(jī)吸(xī)取(qǔ)細(xì)胞懸(xuán)液(yè)加入預冷(lěng)的(dí)1.5mL離心管(guǎn)中，離(lí)心(xīn)，棄上清(qīng)，將細(xì)胞(bāo)沉澱(diàn)置(zhì)於冰上。
（3）按(àn)1∶2體積(jī)比，將(jiāng)一份體積(jī)的含1%BSA的DMEM加入2份體積(jī)的(dí)的細胞外基(jī)質膠(jiāo)（Corning#356231）中，輕輕混(hùn)匀（全程冰上(shàng)操作），然後(hòu)在(zài)冰上(shàng)將(jiāng)配好的(dí)基質(zhì)膠混合液(yè)與(yǔ)細(xì)胞沉澱充(chōng)分(fēn)混匀。
（4）將細胞(bāo)沉(chén)澱與基質膠(jiāo)的混(hùn)合(hé)液按照(zhào)35μL/孔(kǒng)滴在(zài)已(yǐ)提前預(yù)熱好(hǎo)的(dí)24孔板中(zhōng)央，使之形成(chéng)圓頂狀膠(jiāo)滴。緩慢(màn)將細胞(bāo)培養板(bǎn)移至培(péi)養(yǎng)箱至(zhì)少30分(fēn)鐘。
（5）待基(jī)質膠*凝(níng)固，沿24孔壁緩慢加入1mL/孔預先(xiān)恢復至室(shì)溫的(dí)本(běn)類器官培養基(jī)，並將(jiāng)培(péi)養板(bǎn)置於(yú)37℃，5%CO2條件(jiàn)下靜置(zhì)培養。
（6）鏡(jìng)下觀(guān)察類器(qì)官(guān)形成(chéng)情況，每3~4天更(gēng)換一(yī)次培養基。
◉  乳(rǔ)腺癌(ái)類器官收(shōu)集(jí)
（1）棄(qì)去培(péi)養基，用(yòng)基(jī)質(zhì)膠解(jiě)離試(shì)劑潤洗槍(qiāng)頭後(hòu)，每孔(kǒng)加入(rù)1mL該(gāi)試劑，靜(jìng)置(zhì)1min。
（2）用(yòng)基(jī)質膠(jiāo)解離(lí)試劑潤(rùn)洗槍頭後(hòu)，吸(xī)取孔(kǒng)內液體，輕輕吹打圓頂(dǐng)狀(zhuàng)膠滴表(biǎo)麵(miàn)，將膠滴吹散(sàn)，並(bìng)將吹散(sàn)後(hòu)的(dí)含(hán)類器(qì)官的(dí)混(hùn)合液收(shōu)集至(zhì)15 mL離心(xīn)管(guǎn)中。
（3）重復一(yī)次上述操作(zuò)，將兩次(cì)洗脫(tuō)下(xià)來(lái)的(dí)類(lèi)器官合並收集於同一15mL離(lí)心管中。
（4）37℃，75rpm水平(píng)搖床(chuáng)上(shàng)解(jiě)離10min（具體解離時間根(gēn)據(jù)實際情況決(jué)定(dìng)，以(yǐ)無明顯大塊膠(jiāo)狀物為準）。
（5）10分(fēn)鐘(zhōng)後(hòu)在4℃下(xià)，300g，離心5min，小(xiǎo)心(xīn)吸棄(qì)上(shàng)清(qīng)，沉(chén)澱待(dài)用。
◉  乳(rǔ)腺癌類器(qì)官傳(chuán)代
（1）收集(jí)好的(dí)細胞(bāo)沉(chén)澱（以(yǐ)無(wú)肉(ròu)眼可見基質(zhì)膠狀沉澱為準）加入(rù)預冷的含(hán)1%BSA的(dí)DMEM培(péi)養基(jī)重(zhòng)懸，在4℃下(xià)，300g，離(lí)心5min。
（2）小(xiǎo)心(xīn)吸棄(qì)上清，沉澱用含(hán)1%BSA的DMEM培養基(jī)重懸(xuán)計(jì)數(shù)。
（3）按(àn)照(zhào)培養(yǎng)步(bù)驟(zhòu)操(cāo)作，以大(dà)約1000個類器官(guān)/孔(kǒng)密度重(zhòng)新接種類(lèi)器(qì)官(guān)，繼續擴大培養。
注(zhù)意(yì)事項：
1.本產品在(zài)使用(yòng)前(qián)需平(píng)衡(héng)至(zhì)室溫。
2.使(shǐ)用(yòng)產(chǎn)品(pǐn)時應注(zhù)意無菌(jūn)操(cāo)作(zuò)，避(bì)免汙(wū)染。
3.本產(chǎn)品中(zhōng)不含(hán)血(xiě)清，含(hán)有抗生(shēng)素，如(rú)無特別需要，不用額(é)外添加(jiā)血清和其他抗(kàng)生素(sù)，可(kě)直接使用。
4.為(wéi)保(bǎo)持本產品(pǐn)的最(zuì)佳(jiā)使用效果(guǒ)，不(bù)宜將其過夜放置於室(shì)溫或較高的(dí)溫度(dù)環(huán)境中。5.請於保(bǎo)質期(qī)內(nèi)使用(yòng)本產品，超出保質(zhì)期(qī)後(hòu)，將無法達(dá)到理(lǐ)想(xiǎng)的(dí)使用(yòng)效果(guǒ)。
6.乳腺(xiàn)組(zǔ)織樣(yàng)本(běn)建(jiàn)議為(wéi)腫(zhǒng)瘤術中樣本(běn)，且腫瘤細胞比(bǐ)例越高（至(zhì)少>50%），培養(yǎng)成功率越高(gāo)，不(bù)推薦用於少(shǎo)量(liáng)樣(yàng)本(běn)（如穿(chuān)刺(cì)或循環腫(zhǒng)瘤細胞(bāo)）的(dí)培(péi)養。
7.本(běn)產(chǎn)品(pǐn)僅用於(yú)科研(yán)用途(tú)，不能用(yòng)於體外診斷(duàn)。