蛋白(bái)純(chún)化是指通過基因工(gōng)程(chéng)技(jì)術(shù)將編(biān)碼(mǎ)蛋(dàn)白(bái)的(dí)核酸序列(liè)導(dǎo)入到(dào)宿主細(xì)胞(bāo)，使(shǐ)其大量表(biǎo)達，再使(shǐ)用(yòng)適當的純化方法將其(qí)在(zài)體外純化出來(lái)，從(cóng)而獲(huò)得(dé)高(gāo)純度(dù)，活性(xìng)和產(chǎn)量的蛋白質。蛋(dàn)白(bái)質表達係(xì)統可(kě)以分為原核表(biǎo)達係統和(hé)真核表達係(xì)統兩(liǎng)大類。那(nà)麼你知(zhī)道蛋白(bái)質純(chún)化(huà)的(dí)原理(lǐ)是什麼(mó)嗎？讓(ràng)我(wǒ)們一起(qǐ)來看看吧！

一(yī)，乳糖操(cāo)縱(zòng)子(zǐ)的負調(tiáo)控

在(zài)沒有(yǒu)乳(rǔ)糖存在(zài)時(shí)，lac操(cāo)縱子(zǐ)處(chǔ)於(yú)阻遏狀態，此時，I序列(liè)表達Lac阻(zǔ)遏蛋白(bái)與(yǔ)O序列結(jié)合(hé)，阻(zǔ)礙RNA聚合酶與(yǔ)P序列結合(hé)，抑製轉(zhuǎn)錄(lù)啟(qǐ)動。當有乳(rǔ)糖(táng)存在時，乳(rǔ)糖(táng)進入(rù)細胞(bāo)，經β-半(bàn)乳糖(táng)苷(gān)酶(méi)催化，轉變為(wéi)異乳糖，異乳糖(táng)結(jié)合阻遏蛋(dàn)白(bái)，使(shǐ)蛋(dàn)白構象(xiàng)變化，導致(zhì)阻遏蛋白與(yǔ)O序(xù)列解離(lí)，從而啟(qǐ)動(dòng)轉錄。

異丙基(jī)硫代(dài)半乳(rǔ)糖苷（IPTG）的作(zuò)用與異乳(rǔ)糖相(xiāng)同(tóng)，是一種(zhǒng)作用(yòng)ji強(qiáng)的(dí)誘(yòu)導(dǎo)劑，不被細菌代(dài)謝而十(shí)分穩(wěn)定，因此(cǐ)被實(shí)驗室廣(guǎng)泛(fàn)應用(yòng)。

二，宿主(zhǔ)菌(jūn)株(zhū)的(dí)選擇

（1）BL21是(shì)zui常(cháng)用(yòng)於(yú)原核(hé)表(biǎo)達(dá)的(dí)菌株(zhū)之(zhī)一，主要(yào)適用於(yú)非(fēi)毒性蛋白的表(biǎo)達，具有大(dà)腸杆菌(jūn)聚(jù)合(hé)酶，故(gù)可適(shì)用(yòng)於tac或trc等使用大腸(cháng)杆菌RNA聚(jù)合酶的原核係(xì)統(tǒng)的表達(dá)（如
：pGEX，pMAL質粒(lì)）。

（2）BL21(DE3)在(zài)BL21菌株的(dí)染色體上整(zhěng)合(hé)了(liǎo)λ噬菌體DE3區的T7噬(shì)菌(jūn)體RNA聚合酶(méi)基因(yīn)，可(kě)同時(shí)表(biǎo)達T7 RNA聚合(hé)酶(méi)和(hé)大(dà)腸(cháng)杆(gān)菌RNA聚合酶，可用於pET係(xì)列(liè)，pGEX，pMAL等質(zhì)粒(lì)的表達(dá)。

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