細胞(bāo)培(péi)養(yǎng)是(shì)指從體(tǐ)內組(zǔ)織取出細胞(bāo)在體外模擬體(tǐ)內環(huán)境(jìng)下，在無菌，適溫和豐(fēng)富的營養(yǎng)條件下，使其(qí)生(shēng)長(cháng)繁(fán)殖(zhí)，並維持(chí)其結(jié)構和功(gōng)能的一(yī)種(zhǒng)培養(yǎng)技術
。那麼你(nǐ)知道(dào)細(xì)胞傳代培養(yǎng)的常(cháng)見問題有哪(nǎ)些嗎(má)？讓我(wǒ)們(mén)一起(qǐ)來看看吧(bā)！

一(yī)，細胞(bāo)何(hé)時(shí)進行傳代(dài)

通常(cháng)當細胞生(shēng)長至wan全匯(huì)合(hé)進行傳代，避(bì)免(miǎn)細胞生(shēng)長(cháng)過(guò)密，對(duì)於(yú)特殊情(qíng)況，比(bǐ)如有接觸抑(yì)製的細胞，一般在密度70-80%就進(jìn)行傳代，避免(miǎn)引起(qǐ)細(xì)胞分(fēn)化(huà)
。

二，貼壁細胞胰(yí)酶消化如(rú)何(hé)控(kòng)製時(shí)間

貼壁細胞(bāo)培(péi)養一個關(guān)鍵步(bù)驟胰酶消化，消化過度(dù)會導(dǎo)致細(xì)胞(bāo)碎(suì)片(piàn)增多，細(xì)胞(bāo)成(chéng)片脫(tuō)落，嚴重影響(xiǎng)細(xì)胞(bāo)活(huó)性，並有部分細胞漂(piāo)浮(fú)，隨棄去(qù)的胰(yí)酶(méi)流失(shī)，消(xiāo)化不(bù)足則(zé)細胞難(nán)於(yú)從瓶壁(bì)上吹下(xià)，反(fǎn)復(fù)吹打(dǎ)造(zào)成細胞損(sǔn)傷(shāng)，活性(xìng)下降(jiàng)
。

一(yī)般濃度在(zài)0.25-0.5%
。作用時間(jiān)根據細(xì)胞種(zhǒng)類(lèi)，作用溫(wēn)度等因(yīn)素而變(biàn)化(huà)很(hěn)大(dà)，從幾分(fēn)鐘(zhōng)到幾十分(fēn)鐘(zhōng)不(bù)等
。0.25%的胰(yí)酶作用(yòng)於(yú)單(dān)層貼壁的(dí)細(xì)胞，在37度條(tiáo)件下(xià)，一(yī)般(bān)消化(huà)1-5分(fēn)鐘就(jiù)足夠了
。終止是用血清
。主(zhǔ)要對於新(xīn)購(gòu)買的細胞(bāo)，可(kě)以先用低濃度的(dí)胰(yí)酶去(qù)摸索一下(xià)消(xiāo)化(huà)時(shí)間，可(kě)每隔(gé)1分(fēn)鐘(zhōng)鏡(jìng)下(xià)觀(guān)察細胞(bāo)是(shì)否變(biàn)圓，記錄最佳(jiā)消(xiāo)化時(shí)間，下一(yī)次操作(zuò)參考(kǎo)之前(qián)的記錄來控製時間(jiān)即可
。

三(sān)，如(rú)何看活細胞(bāo)

可通(tōng)過顯微鏡觀(guān)察：活細胞中間透亮，飽(bǎo)滿，有(yǒu)光澤(zé)，死細胞(bāo)較暗(àn)
。或通(tōng)過台盼(pàn)藍染(rǎn)色來(lái)計算(suàn)細(xì)胞(bāo)活(huó)力，活細(xì)胞排斥台盼(pàn)蘭，因而染成藍色的(dí)細胞是死(sǐ)細胞(bāo)
。有細胞計數儀(yí)的(dí)，可直(zhí)接用(yòng)計(jì)數儀(yí)計(jì)數(shù)
。

四，細(xì)胞傳(chuán)幾(jī)代開(kāi)始死(sǐ)亡(wáng)或細胞存活(huó)率不佳(jiā)，增(zēng)值變(biàn)慢(màn)

可能(néng)是(shì)培(péi)養基(jī)使用(yòng)錯(cuò)誤或培養(yǎng)基(jī)品(pǐn)質(zhì)不佳
；血清使用(yòng)錯誤(wù)或(huò)血清的(dí)品質不佳(jiā)
；或(huò)者消(xiāo)化過度(dù)，對(duì)細(xì)胞有嚴(yán)重影響
；或者(zhě)是(shì)傳(chuán)代比例不(bù)合(hé)適
；細胞(bāo)存(cún)在汙染(rǎn)等
。

五，細胞(bāo)在培養中(zhōng)常出(chū)現(xiàn)黑(hēi)點

首先肉眼(yǎn)觀察培養液是(shì)否變渾濁(zhuó)，如果變渾濁，基(jī)本(běn)可以確定(dìng)是汙染(rǎn);如(rú)果肉眼(yǎn)觀察(chá)培(péi)養液(yè)沒有變(biàn)渾(hún)濁：在顯微鏡(jìng)下觀察(chá)黑點大小(xiǎo)和(hé)形狀(zhuàng)是(shì)否規(guī)則，是(shì)否運(yùn)動(dòng)，是做布(bù)朗運動還是(shì)呈直綫(xiàn)型快速移(yí)動
。如(rú)果黑(hēi)點大(dà)小不規則，做(zuò)布(bù)朗運(yùn)動(dòng)，黑(hēi)點可能(néng)是(shì)細胞(bāo)碎片(可(kě)能是細胞(bāo)狀態不(bù)佳或(huò)者消化(huà)過度(dù)引起(qǐ)的(dí))，也可(kě)能是(shì)血清(qīng)反復凍融產生的(dí)蛋白沉(chén)澱引起的，也可(kě)能是(shì)細(xì)胞(bāo)的(dí)代(dài)謝(xiè)產(chǎn)物
。如果(guǒ)黑點大(dà)小(xiǎo)一致，快(kuài)速(sù)移(yí)動(dòng)，很(hěn)可能(néng)是細菌汙染(rǎn)
。

六，細胞成(chéng)團的原(yuán)因(yīn)

1. 消化(huà)時(shí)吹(chuī)打太用(yòng)力(lì)，消化(huà)太久(jiǔ)，消(xiāo)化液太(tài)強或有毒(dú)性(xìng)等(děng)細(xì)胞死(sǐ)亡(wáng)釋(shì)放(fàng)出DNA，纏繞其(qí)他(tā)細胞，形(xíng)成(chéng)黏(nián)性的(dí)細胞團(tuán)
。

2. 細胞離心(xīn)速度過大(dà)或時間太長
。

3. 消化不wan全(quán)的時候，細胞(bāo)和(hé)細胞(bāo)之間的連接沒(méi)有(yǒu)分開
；消化過(guò)度的(dí)時(shí)候，圓(yuán)形的細(xì)胞容(róng)易聚堆，再(zài)分(fēn)開很困(kùn)難！

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