基(jī)因(yīn)工程(chéng)中用到的連(lián)接酶(méi)主(zhǔ)要是大(dà)腸杆菌DNA連接酶(méi)以及(jí)T4 DNA連(lián)接酶，目(mù)前後者(zhě)的應用更(gēng)為(wéi)廣泛。T4 DNA連接(jiē)酶可(kě)以(yǐ)修補(bǔ)雙鏈(liàn)DNA，雙鏈RNA或DNA/RNA雜(zá)合(hé)鏈(liàn)上(shàng)的單(dān)鏈切口，使兩個相(xiāng)鄰(lín)的核苷(gān)酸連接(jiē)起(qǐ)來(lái)，在(zài)DNA修(xiū)復(fù)和(hé)重(zhòng)組中(zhōng)起(qǐ)著重要的作(zuò)用(yòng)。下麵讓我們一起(qǐ)來看(kàn)看(kàn)NEB T4 DNA連(lián)接酶(M0202V)的產品介紹(shào)。

NEB T4 DNA連接酶(méi)可以(yǐ)催化(huà)雙鏈DNA或(huò)RNA中並列(liè)的(dí)5'磷酸鹽(yán)和3'羥基末端之間形成磷酸二(èr)酯酶(méi)鍵(jiàn)。這種酶將連接鈍(dùn)端和內聚(jù)端，並(bìng)修復(fù)雙(shuāng)鏈(liàn)DNA和一些DNA/RNA雜交(jiāo)體中的(dí)單鏈缺口。

操作(zuò)方(fāng)法(fǎ)：

1. 在冰(bīng)上的(dí)微(wēi)量(liáng)離心管中設置(zhì)以下(xià)反應。

* T4 DNA 連(lián)接酶(méi)緩衝(chōng)液應解凍並(bìng)在(zài)室溫下重懸(xuán)。

2. 通過(guò)上(shàng)下移液和(hé)微(wēi)量離心輕輕混(hùn)合(hé)反應。

3. 對(duì)於(yú)粘性(xìng)（粘(nián)性(xìng)）末(mò)端(duān)，在(zài) 16°C 下孵育過(guò)夜(yè)或室(shì)溫(wēn)孵育 10 分(fēn)鐘。

4. 對(duì)於(yú)鈍(dùn)端(duān)或(huò)單鹼(jiǎn)基突出端，在(zài) 16°C 下孵(fū)育過夜或(huò)室溫(wēn)孵(fū)育 2 小(xiǎo)時（或者(zhě)，5. 高濃度 T4 DNA 連(lián)接酶(méi)可(kě)用(yòng)於 10 分鐘的(dí)連(lián)接）。

6. 在 65°C 下加熱(rè)滅活(huó) 10 分鐘(zhōng)。

7. 在冰(bīng)上冷(lěng)卻(què)並(bìng)將1-5μl反應物(wù)轉(zhuǎn)化為(wéi)50μl感(gǎn)受(shòu)態細(xì)胞(bāo)。

產品選(xuǎn)購：