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更新(xīn)時(shí)間(jiān):2024-03-21
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全(quán)式金Trans5α化學(xué)感受(shòu)態細胞(CD201-02)是經過(guò)特(tè)殊工(gōng)藝製作(zuò)的細(xì)胞(bāo),適用於DNA的(dí)化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用(yòng)pUC19質粒DNA進行(háng)測(cè)試時(shí),轉(zhuǎn)化效率(shuài)可(kě)高(gāo)達每(měi)微(wēi)克DNA超過(guò)108個轉化單位(cfu)。該(gāi)菌株的基因型為(wéi)F-φ80d lacZ△M15△(lacZYA-argF)U169 end Al recA1 hsdR17(rk-,mk+)supE44λ-thi-1 gyrA96 relA1 phoA。
全式(shì)金Trans5α化(huà)學感受態(tài)細胞(CD201-02)也(yě)適用於藍白斑篩選,其突變基(jī)因(yīn)recA₁和endA₁有助於(yú)克(kè)隆DNA的(dí)穩定(dìng)性和高純度質粒(lì)DNA的(dí)提取。這種細胞可(kě)以(yǐ)在-70℃保(bǎo)存六個月,但不適(shì)合(hé)在液氮(dàn)中(zhōng)保存(cún)。請(qǐng)注意遵循適(shì)當(dāng)的存(cún)儲條(tiáo)件以確保細胞(bāo)的長(cháng)期(qī)保存和使用質(zhì)量(liáng)。
操作(zuò)方法:
·取(qǔ)50 ml冰浴上(shàng)融(róng)化(huà)的感受態(tài)細(xì)胞(bāo),加入目的(dí)DNA,輕(qīng)輕(qīng)混匀(yún),在冰(bīng)浴中(zhōng)放(fàng)置30分鐘。
·42℃水浴熱激45秒(miǎo),然後快(kuài)速將(jiāng)管轉(zhuǎn)移(yí)到冰浴中2分鐘,該過程(chéng)不(bù)要搖動離(lí)心(xīn)管。
·向每(měi)個(gè)離心管中(zhōng)加(jiā)入500μ無菌(jūn)的SOC或LB培(péi)養基(jī)(不含(hán)抗生(shēng)素(sù)),混匀(yún)後置(zhì)於(yú)37℃,200rpm培養(yǎng)1小時(shí)使細(xì)菌復(fù)蘇(sū)。
·根據(jù)實(shí)驗要(yào)求(質粒(lì),重組連(lián)接產(chǎn)物(wù)轉化),吸取不同(tóng)體(tǐ)積已(yǐ)轉化(huà)的(dí)感受態(tài)細(xì)胞(bāo)加(jiā)到(dào)含(hán)相(xiāng)應抗生素的LB瓊(qióng)脂培養基上(shàng),將細胞(bāo)均匀塗開(kāi)。將平(píng)板置於37℃至(zhì)液體(tǐ)被吸(xī)收,倒置平板,37℃過(guò)夜(yè)培(péi)養。
注意事(shì)項(xiàng):
· 避(bì)免反復(fù)凍融(róng):盡(jìn)量避(bì)免(miǎn)頻繁(fán)地凍(dòng)融(róng)細(xì)胞。每次解(jiě)凍後,盡可能(néng)立即進(jìn)行(háng)轉(zhuǎn)化實(shí)驗,而(ér)不(bù)是(shì)將其再(zài)次冷(lěng)凍(dòng)。
· 避免使(shǐ)用移液槍吹(chuī)吸:在操作過(guò)程中,盡量(liáng)避(bì)免(miǎn)使用(yòng)移液槍進行強力(lì)吸取和(hé)排放細(xì)胞(bāo)。這樣(yàng)可以減少對(duì)細胞(bāo)的(dí)機械壓(yā)力和損傷。
· 輕(qīng)柔(róu)操(cāo)作(zuò):在(zài)整個操作過(guò)程中(zhōng)要(yào)注意輕(qīng)柔處(chǔ)理(lǐ)細(xì)胞(bāo)。避免過(guò)度搖動或震蕩(dàng)細胞,以防止細(xì)胞破裂或損壞(huài)。
產(chǎn)品選購(gòu):
貨號 | 產品名稱(chēng) | 規(guī)格 |
CD201-02 | Trans5α Chemically Competent Cell | 20×100 μl |
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