產品(pǐn)名稱：血漿(jiāng)cfDNA提(tí)取(qǔ)試(shì)劑(jì)盒(hé)（離心柱）

產(chǎn)品貨(huò)號：TD476-50 (50 次反應(yīng))

產品(pǐn)亮點(diǎn)：

可從(cóng) 10ml 以內(nèi)的血清/血漿，1m 以(yǐ)內的(dí)羊水或腦脊(jǐ)液中提取到高純度(dù)的遊離 DNA
。

獲(huò)得的(dí) DNA產(chǎn)量高，純(chún)度(dù)好，可(kě)以(yǐ)直接用(yòng)於酶(méi)切，PCR，高(gāo)通(tōng)量(liáng)測序等(děng)分子(zǐ)生(shēng)物學實驗
。

注(zhù)意(yì)事(shì)項(xiàng)：

環境溫(wēn)度(dù)低(dī)時(shí) SP消化(huà)液(yè)或者(zhě) SPDNA洗(xǐ)滌(dí)液1可能出現(xiàn)析出和沉(chén)澱，可(kě)以(yǐ)在 37℃水浴(yù)幾分(fēn)鐘(zhōng)幫(bāng)助重(zhòng)新(xīn)溶(róng)解(jiě)，恢復澄清(qīng)透(tòu)明後冷卻(què)到(dào)室溫(wēn)即(jí)可(kě)使用
。

蛋白酶K及(jí)其保存液可(kě)常(cháng)溫運(yùn)輸
。

產品特(tè)性：

樣品種類(lèi): 血清，血漿(jiāng)，羊水(shuǐ)和腦脊(jǐ)液(yè)（CSF）

處(chǔ)理的(dí)體(tǐ)積量: 血(xiě)漿(jiāng)- 單次(cì)離(lí)心：最(zuì)多(duō) 3ml  兩次(cì)離(lí)心：最多 10ml

血(xiě)清- 最多(duō) 10ml

羊(yáng)水- 最多 1ml

腦脊(jǐ)液- 最多(duō) 1ml 

DNA 純(chún)度(dù): 獲得的(dí) DNA 產量(liáng)高，純(chún)度(dù)好， 可以(yǐ)直接用(yòng)於 qPCR 高通量(liáng)測序(xù)等(děng)各(gè)種分子(zǐ)生(shēng)物學(xué)實驗
。

DNA 回(huí)收情況: 回(huí)收的(dí) DNA≥100bp(本(běn)試劑(jì)盒針(zhēn)對無細胞的 DNA 提取經(jīng)過(guò)優化)，總(zǒng)量根據不(bù)同(tóng)的(dí)樣(yàng)品(pǐn)個體差(chà)異(yì)可能(néng)會(huì)比較大(dà)
。一般從血清或(huò)血(xiě)漿中提取到(dào)的 DNA 濃度(dù)在 1-100 ng/ml
。

需(xū)要的(dí)儀器(qì)設備:水浴鍋或者金(jīn)屬(shǔ)浴（55℃）
。微型離心(xīn)機，負(fù)壓多(duō)聯(lián)器或(huò)立式離心(xīn)機

試(shì)劑製備：

1.使用(yòng)前需(xū)要添(tiān)加6.5ml蛋白(bái)酶K保存液(yè)到蛋白酶K(125mg)裏(lǐ)
。蛋(dàn)白酶K的終濃度約為20mg/ml
。混(hùn)匀之後(hòu)放在(zài)-20℃保存(cún)

2.使用(yòng)前需要添加(jiā)48 ml 95-100%的無水(shuǐ)乙醇(chún)到(dào)12ml的SP DNA洗滌(dí)液(yè)2中
。(B)蛋白(bái)消(xiāo)化(huà)

操作步(bù)驟(zhòu)：

從≤5ml的(dí)樣(yàng)品中提取(qǔ)遊離 DNA

除(chú)非特殊(shū)說明(míng)，一般(bān)常溫(15-30℃)進(jìn)行以(yǐ)下操作步驟，以下步驟(zhòu)以(yǐ) 200u血(xiě)漿，血(xiě)清或其他(tā)生(shēng)物液體樣品為例(lì)，當樣(yàng)品量(liáng)發生變化的時候，隻需要(yào)等比例(lì)的調整 SP 消化液，蛋白酶K和(hé) SP DNA 結(jié)合(hé)液(yè)的用(yòng)量就(jiù)可以
。

1.添(tiān)加(jiā) 50u 的(dí) SP 消化(huà)液到(dào)每(měi) 200u 的樣(yàng)品(pǐn)中，混匀
。(根據表(biǎo)格(gé)1按(àn)照(zhào)一定比(bǐ)例添加試(shì)劑(jì))2.添(tiān)加 20u 的蛋(dàn)白酶(méi) K到(dào)每(měi) 200m 的樣(yàng)品中，混(hùn)匀
。(根據表格1按照(zhào)一定(dìng)比(bǐ)例(lì)添加試(shì)劑)3.在 55℃下孵(fū)育 30 分鐘(zhōng)
。

4.添加 2 倍體(tǐ)積的 SP DNA 結(jié)合液到步驟 3中消(xiāo)化的(dí)樣(yàng)品中，混匀(yún)
。

以(yǐ)下(xià)步驟可以通過(guò)真空負(fù)壓的方式也可(kě)以(yǐ)通過離(lí)心的方式(shì)進(jìn)行(háng)操作(zuò)(負壓設備所用真(zhēn)空(kōng)多連器推薦美國 ZYMORESEARCH 公(gōng)司(sī))

負(fù)壓操作(zuò)步(bù)驟(zhòu):

5.確認3號(hào)柱S套裝(連(lián)接15ml套筒)連接(jiē)緊密後(hòu)放置在負壓多連器(qì)上
。

6.倒(dǎo)入(rù)上述(shù)步(bù)驟(zhòu)4的混(hùn)合液(含 SP DNA 結(jié)合(hé)液)，打(dǎ)開(kāi)真(zhēn)空開(kāi)關(guān)使(shǐ)液體通(tōng)過(guò)柱(zhù)子
。確保液體通過(guò)柱子(zǐ)並且(qiě)沒(méi)有殘(cán)留(liú)液(yè)體下(xià)流(liú)後，關(guān)閉(bì)真空泵並拔(bá)掉(diào)連接的(dí) 15ml套(tào)筒
。

以(yǐ)下(xià)步(bù)驟(zhòu) 7-8 也可以(yǐ)用(yòng)台式離心機(jī)操作(zuò)
。

7.關(guān)掉真空(kōng)開關，倒入 400uSP DNA洗(xǐ)滌液1到(dào)柱子上，打開(kāi)真(zhēn)空(kōng)開關，讓液體通過3號(hào)柱(zhù)S

8.關(guān)掉真空開關(guān)，加入 700μSP DNA 洗滌液 2(請先(xiān)檢査(chá)是否(fǒu)已(yǐ)加(jiā)入(rù)無水乙(yǐ)醇(chún)!)到(dào)3號(hào)柱S內，打開(kāi)真(zhēn)空(kōng)開(kāi)關(guān)讓液體通過(guò)柱子(zǐ)
。

9.重復第(dì) 8步
。

10.將(jiāng)3號柱S套(tào)在 2ml收集管(guǎn)上，然後放(fàng)置在台(tái)式離心機(jī)上全速(sù)離(lí)心2分(fēn)鐘以(yǐ)去除(chú)殘留(liú)乙(yǐ)醇(chún)
。

11.將3號柱(zhù)S套(tào)在(zài)一個幹淨(jìng)的 1.5m離(lí)心管內(nèi)，添加 50u的 DNA洗脫液(yè)到柱基(jī)質上(shàng)
。(洗(xǐ)脫液(yè)事先在 65-70℃水浴中預(yù)熱(rè)，洗(xǐ)脫(tuō)效果更好(hǎo))，室溫放置3分鐘，在>10,000xg條件(jiàn)下(xià)離(lí)心(xīn)1分鐘來(lái)洗(xǐ)脫 DNA
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