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產品(pǐn)中心
產(chǎn)品簡介
BrainBits小(xiǎo)鼠小腦(nǎo)培養(yǎng)試(shì)劑盒，包(bāo)含(hán)從(cóng)新鮮組(zǔ)織(zhī)開(kāi)始培養所(suǒ)需(xū)的(dí)一(yī)切(qiē)。E18組織用2ml含B27的THRYVE胚(pēi)胎(tāi)儲(chǔ)存(cún)介質(zhì)運(yùn)送(sòng)。
產品(pǐn)分(fēn)類(lèi)
一(yī)，產品簡介(jiè)
BrainBits小鼠(shǔ)小腦(nǎo)培(péi)養(yǎng)試(shì)劑盒(hé)，產(chǎn)品組(zǔ)分(fēn)：1 個E18小(xiǎo)鼠小腦，12mL NbAstro，6.2mg木瓜(guā)蛋(dàn)白酶，5mL HE-Ca ，1個帶橡膠球(qiú)的火拋光移液，1對PDL塗層蓋(gài)板。
二(èr)，產品(pǐn)使用
（一）製劑（無菌(jūn)罩室(shì)溫(wēn)）
1. 將(jiāng)6mg無菌木(mù)瓜蛋(dàn)白酶（PAP 6mg）溶解於3ml THRYVE Embryonic-CaCl中(zhōng)，製(zhì)備細(xì)胞解(jiě)離液，最(zuì)終工作(zuò)濃度(dù)為(wéi)2毫(háo)克/毫升木(mù)瓜(guā)蛋白酶(méi)。在30℃下孵育(yù)10分鐘(zhōng)使其(qí)溶解。放(fàng)入冰箱或(huò)冰(bīng)中備(bèi)用。組織和(hé)木(mù)瓜蛋白酶必(bì)須處於(yú)相同(tóng)的溫度（根據(jù)處理組織(zhī)的數量，可(kě)能(néng)需要幾(jī)個單位）。
2. 將80µl台(tái)普蘭藍（Sigma T8154）加入0.5ml試(shì)管中進(jìn)行第9步。
（二(èr)）細胞分散(sàn)（無(wú)菌罩室溫(wēn)）：
1. 用2ml移液(yè)管，用(yòng)最少的(dí)培(péi)養基(jī)小心地將(jiāng)組織(zhī)轉移(yí)到木(mù)瓜(guā)蛋白(bái)酶上。將THRYVE胚(pēi)胎wanquan移植到一個新的無(wú)菌15ml試管中(zhōng)
保存(cún)到步驟(zhòu)3。
2. 組(zǔ)織與(yǔ)木瓜蛋(dàn)白(bái)酶在(zài)30℃下孵育10分鐘。輕輕(qīng)地旋轉(zhuǎn)每(měi)2分(fēn)鐘或(huò)使(shǐ)用(yòng)加熱搖(yáo)振板(bǎn)在30℃和150rpm。
3. 用2ml移(yí)液管(guǎn)從(cóng)木瓜蛋(dàn)白(bái)酶(méi)中除(chú)去(qù)帶有少量培(péi)養(yǎng)基(jī)的組織，並從步驟1中返回(huí)THRYVE胚(pēi)胎wanquan培養基(jī)。
4. 使(shǐ)用矽化(huà)巴(bā)斯(sī)德移液器，將組(zǔ)織分散不(bù)超(chāo)過10倍或90%，避免產生(shēng)氣泡。可選(xuǎn)：加入(rù)400µl 1mg/ml DNase I溶(róng)液（StemCell Technologies 07469）加入(rù)細胞(bāo)漿液(yè)中，在室溫下(xià)孵(fū)育(yù)15分(fēn)鐘(zhōng)，輕彈或旋轉(zhuǎn)。
5. 讓(ràng)未分散的(dí)碎片(piàn)靜置(zhì)1分鐘(zhōng)。
6. 將含(hán)有分(fēn)散細胞的上清液轉(zhuǎn)移(yí)到15ml無菌(jūn)管中。留下約50μl含(hán)有碎(suì)片的(dí)THRYVE胚胎wanquan體。可選用(yòng)70µm濾(lǜ)池過濾細胞(bāo)液。
7. 旋轉(zhuǎn)1100rpm (200 x G) 1分鐘(zhōng)。丟棄(qì)上(shàng)清，留下含有微球(qiú)的約50μl THRYVE胚(pēi)胎wanquan液(yè)。
8. 分散細(xì)胞(bāo)顆粒(lì)（用手指或(huò)管(guǎn)輕(qīng)彈管底部(bù)），重懸(xuán)於(yú)1ml NbActiv1™中(zhōng)。
9. 取20μl細(xì)胞液加入含有80μl台盼藍（1:5稀釋(shì)）的(dí)0.5ml試管(guǎn)中，或(huò)按(àn)實驗室(shì)現(xiàn)行(háng)計(jì)數(shù)程序(xù)計(jì)數。
10. 使用血(xiě)細胞(bāo)計(jì)（計(jì)算細胞(bāo)/ml）或使用當(dāng)前(qián)的實驗(yàn)室(shì)程(chéng)序計數(shù)細胞(bāo)。
（三(sān)）細(xì)胞(bāo)電鍍(dù)（無(wú)菌(jūn)罩室(shì)溫）：
1. 用NbActiv1™稀(xī)釋0.2ml/cm2的細胞，並以16,000個(gè)細(xì)胞/cm2或所需濃度進行(háng)板載。
2. 37℃，5% CO2, 9% O2, 95%濕(shī)度(dù)（或環境(jìng)O2）孵(fū)育。
3. 4天(tiān)後(hòu)，神(shén)經元顯示軸(zhóu)突(tū)和樹突(tū)；突(tū)觸(chù)和(hé)動作電(diàn)位(wèi)開(kāi)始於7天。
4. 每3-4天用(yòng)新鮮的37℃CO2平(píng)衡(héng)NbActiv1™更(gēng)換一半的(dí)培(péi)養基。
（四(sì)）可行性分析:
1. 用(yòng)37℃HBSS （0.2ml/cm2底物(wù)）衝(chōng)洗兩次。
2. 用(yòng)15mg/ml雙醋(cù)酸熒光素丙酮(tóng)原液(yè)和(hé)4.6mg/ml碘化(huà)丙啶水原(yuán)液(yè)配(pèi)製(zhì)染料(liào)混(hùn)合物，各稀(xī)釋15µl，加(jiā)入1.5ml HBSS（1:100稀(xī)釋）。
3. 在步驟1中(zhōng)加入(rù)的0.2ml HBSS中(zhōng)加入20µl染料(liào)混(hùn)合物（1:10稀釋(shì)）。
4. 約1分(fēn)鐘(zhōng)後，使用適(shì)合(hé)熒光素熒(yíng)光的藍色激(jī)勵(lì)（綠(lǜ)色細胞(bāo)）計數活(huó)細胞(bāo)。用綠(lǜ)色(sè)激(jī)勵(lì)計數死(sǐ)細胞(bāo)碘化丙啶熒光（小(xiǎo)紅(hóng)核）。
5. 生(shēng)存能力=（綠(lǜ)色(sè)細(xì)胞/單(dān)位麵(miàn)積）/（總(zǒng)細胞數/單位麵積）或生存=綠色細(xì)胞(bāo)/（綠(lǜ)色+紅色(sè)細胞(bāo)）。
三，產(chǎn)品(pǐn)目(mù)錄表(biǎo)
SKU | 產(chǎn)品(pǐn)名(míng)稱 | 產品品牌(pái) |
KTC57ECB | 小(xiǎo)鼠(shǔ)小腦(nǎo)培養試劑(jì)盒(hé) | Transnetyx Tissue BrainBits |
BrainBits小(xiǎo)鼠(shǔ)小(xiǎo)腦培養試(shì)劑盒——天津益元(yuán)利康(kāng)生(shēng)物科(kē)技有(yǒu)限(xiàn)公(gōng)司！
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