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病毒(dú)滴度的單(dān)位有哪(nǎ)些？
2024-11-22 一(yī)，病毒滴(dī)度病(bìng)毒的(dí)滴度(dù)：單位(wèi)體積(通常(cháng)為(wéi)mL)液體中具有(yǒu)生(shēng)物活性(xìng)的病毒顆粒(lì)數(shù)。滴度是(shì)一個病毒(dú)自(zì)身復製的(dí)數量(liáng)概念(niàn)，可分為(wéi)物理(lǐ)滴度(dù)和感(gǎn)染滴(dī)度。物(wù)理(lǐ)滴度是指(zhǐ)包含病毒基因(yīn)組的病毒顆粒的(dí)濃度，可以(yǐ)通(tōng)過(guò)通(tōng)過(guò)定(dìng)量PCR對病毒顆粒的基(jī)因(yīn)組(zǔ)拷(kǎo)貝(bèi)數進行(háng)檢(jiǎn)測，也(yě)可以通(tōng)過(guò)測定病毒顆(kē)粒(lì)中的(dí)特定(dìng)蛋白進行定(dìng)量(liáng)，但(dàn)物理(lǐ)滴度未(wèi)考(kǎo)慮(lǜ)到(dào)病(bìng)毒活(huó)性(xìng)和感(gǎn)染效(xiào)率(shuài)，因此(cǐ)是不(bù)準(zhǔn)確(què)的。感(gǎn)染滴(dī)度(dù)是(shì)指成功(gōng)轉導細胞的病毒顆粒(lì)的(dí)濃度(dù)，須通過細胞感染實驗來測(cè)定(dìng)，如(rú)利用(yòng)定量PCR對細胞(bāo)中的(dí)病毒基因(yīn)拷貝數進行檢(jiǎn)測，或通過(guò)攜帶熒(yíng)光(guāng)的(dí)病(bìng)毒(dú)感染細...
IHC染色不均(jūn)匀分(fēn)析(xī)
2024-11-22 上(shàng)次(cì)我們分(fēn)享了(liǎo)IHC未染色(sè)或(huò)無(wú)信(xìn)號的原因分(fēn)析(xī)，這次讓我們(mén)來看(kàn)看IHC染色(sè)不均(jūn)匀是(shì)為什麼吧(bā)。一，組織(zhī)切片製(zhì)備(bèi)解(jiě)釋：組(zǔ)織(zhī)切片薄(báo)厚(hòu)不(bù)均(jūn)匀(yún)→建議：更(gēng)換(huàn)刀(dāo)片(piàn)二(èr)，組織(zhī)固定1.解(jiě)釋：酒(jiǔ)精固定不(bù)足會(huì)產生(shēng)偽影(yǐng)；→建議：延長(cháng)固(gù)定時(shí)間；嘗試不(bù)同的固定(dìng)液(yè)2.解釋(shì)：固定(dìng)延(yán)遲導致抗原擴散(sàn)；建議：立即固(gù)定組(zǔ)織；可以考慮使用交聯(lián)固定劑三(sān)，脫蠟(là)解釋(shì)：脫(tuō)蠟不(bù)wan全→建(jiàn)議(yì)：使用(yòng)新(xīn)鮮的二甲(jiǎ)苯四(sì)，抗(kàng)體兼(jiān)容(róng)性解(jiě)釋：一(yī)抗(kàng)可能結(jié)合其他(tā)抗(kàng)原(yuán)上(shàng)的表(biǎo)位→建(jiàn)議：從(cóng)多抗切(qiē)換(huàn)至單抗；嘗試(shì)不(bù)同(tóng)的單抗(kàng)五，透(tòu)化解(jiě)釋：細(xì)胞(bāo)膜(mó)被破(pò)壞，膜蛋白丟(diū)...
IHC未染色或(huò)無(wú)信(xìn)號原因分(fēn)析
2024-11-21 IHC未(wèi)染色(sè)或無(wú)信(xìn)號(hào)的原因：一(yī)，‌抗(kàng)體問題‌：抗體與一抗(kàng)或二抗(kàng)不(bù)兼容(róng)，抗體濃度(dù)不(bù)合(hé)適，抗體失(shī)效或儲存(cún)不當(dāng)等都(dū)會導(dǎo)致無染(rǎn)色(sè)。例如，使用抗一(yī)抗(kàng)種屬來(lái)源的二抗，確認二抗(kàng)是否識(shí)別一抗(kàng)的亞型；使用更高(gāo)濃(nóng)度(dù)的抗體(tǐ)或(huò)延(yán)長(cháng)孵育時(shí)間；設置陽性對照，確(què)保(bǎo)抗(kàng)體仍然有(yǒu)效‌。二，‌抗(kàng)原修復不足(zú)‌：固(gù)定(dìng)步驟(zhòu)可能會(huì)改變抗(kàng)體識別的抗原表(biǎo)位，導(dǎo)致抗(kàng)原修復(fù)不足。使(shǐ)用微(wēi)波或壓力鍋進行抗原(yuán)修復，確(què)保(bǎo)使(shǐ)用(yòng)新鮮配置(zhì)的修復(fù)液‌。三(sān)，‌樣本處(chǔ)理(lǐ)不當‌：樣本存放(fàng)時(shí)間過(guò)長，切片(piàn)製(zhì)備(bèi)不當（如(rú)脫(tuō)蠟不ce底(dǐ)），組(zǔ)織切(qiē)片幹(gān)片等都(dū)會影(yǐng)響...
蛋白芯(xīn)片(piàn)是什(shí)麼？
2024-11-21 一(yī)，蛋(dàn)白芯片簡介‌蛋白芯(xīn)片‌是一(yī)種高通量的(dí)蛋(dàn)白質功(gōng)能分析(xī)檢(jiǎn)測技術，主(zhǔ)要用於監(jiān)測(cè)蛋白質(zhì)之(zhī)間(jiān)的相互(hù)作(zuò)用(yòng)。其(qí)基本(běn)原理(lǐ)是(shì)將各種(zhǒng)蛋白質有序地(dì)固定於載體(tǐ)上，然後(hòu)利用標記了特定熒光物質的抗(kàng)體與芯片上的蛋白質結合(hé)，通過熒(yíng)光強度(dù)分析蛋白質(zhì)的(dí)表達數量和(hé)相互作(zuò)用關係(xì)‌。二，蛋白(bái)芯片的工作原理蛋白芯片(piàn)通(tōng)過將(jiāng)已知(zhī)的(dí)蛋白(bái)質(zhì)分子固定在固相載體(tǐ)上(shàng)，然(rán)後(hòu)捕獲與之特異性結(jié)合的待測蛋白質(zhì)。這(zhè)些待測(cè)蛋(dàn)白(bái)質可能存在於血清(qīng)，血漿(jiāng)，尿液等生(shēng)物樣本(běn)中(zhōng)。通(tōng)過(guò)洗滌和純(chún)化步(bù)驟後，利用熒光掃(sǎo)描儀或激(jī)光(guāng)共(gòng)聚掃(sǎo)描(miáo)技術測定(dìng)各點的(dí)熒光強(qiáng)度(dù)...
如何提(tí)取細(xì)胞(bāo)核(hé)蛋(dàn)白(bái)？
2024-11-20 本文(wén)介(jiè)紹(shào)一(yī)下(xià)用匀漿器研磨法(fǎ)提(tí)取貼(tiē)壁(bì)細(xì)胞(bāo)核蛋白的(dí)具體(tǐ)操作。一(yī)，前(qián)期(qī)準(zhǔn)備(bèi)1，台(tái)盼(pàn)藍染液：取(qǔ)台盼(pàn)藍(lán)粉(fěn)劑，將其(qí)溶解在(zài)10mL的(dí)雙(shuāng)蒸(zhēng)水當中(zhōng)配(pèi)製成質(zhì)量體積比為(wéi)4%（4%w/v）的(dí)台(tái)盼(pàn)藍(lán)母液(yè)。在使用時，利用PBS緩(huǎn)衝液(yè)將母(mǔ)液稀(xī)釋(shì)10倍，使其濃(nóng)度(dù)達到(dào)0.4%，之後再與(yǔ)細(xì)胞懸(xuán)液(yè)混合(hé)均匀。2，BufferA：包含10mmol/L的(dí)HEPES（在4℃下(xià)pH值為7.9），1.5mmol/L的氯化(huà)鎂(měi)，10mmol/L的(dí)KCL，0.5mmol/L的二(èr)硫蘇糖醇（DTT）。若擔心漿蛋白(bái)降解(jiě)會對核蛋白產生影響...
細胞(bāo)凋(diāo)亡(wáng)的檢測(cè)
2024-11-19 一(yī)，光學(xué)顯(xiǎn)微(wēi)鏡(jìng)觀察(chá)凋亡細(xì)胞的(dí)主要特征為核(hé)染(rǎn)色質致密深染(rǎn)，形成致密質(zhì)塊(kuài)，有時可碎裂。檢測方法(fǎ)：細(xì)胞塗(tú)片(piàn)或組織(zhī)石(shí)蠟切片(piàn)作HE染(rǎn)色(sè)或Giemsa染(rǎn)色(sè)，在(zài)高倍(bèi)物鏡下觀(guān)察凋亡細(xì)胞的形態改變(biàn)，結(jié)合顯微(wēi)測(cè)量(liáng)工(gōng)具(jù)可(kě)作(zuò)凋亡細(xì)胞(bāo)計數。二，視(shì)頻(pín)時差顯(xiǎn)微技(jì)術細胞培養中常用，通過相(xiāng)差顯微(wēi)鏡(jìng)可動態觀察細胞凋(diāo)亡的(dí)變化過程(chéng)，尤其是(shì)觀(guān)察細胞(bāo)表和(hé)外(wài)形(xíng)的變(biàn)化。檢(jiǎn)測方法：收(shōu)集2×10^5細(xì)胞(bāo)/ml培(péi)養(yǎng)的細胞，置於多孔(kǒng)培(péi)養板，加入(rù)凋亡(wáng)誘導劑(jì)，在(zài)帶有自動攝像(xiàng)裝置(zhì)的相差顯微(wēi)鏡下觀察凋(diāo)亡細胞的(dí)動態(tài)改(gǎi)變，每隔(gé)1分(fēn)鐘(zhōng)作(zuò)序(xù)列(liè)攝影...
PCR擴增反(fǎn)應中的(dí)嵌(qiàn)合(hé)體(tǐ)是什麼？
2024-11-18 PCR實(shí)驗中(zhōng)產(chǎn)生(shēng)的嵌合體(tǐ)你(nǐ)知道是什(shí)麼呢？它(tā)怎(zěn)麼(mó)產生(shēng)的(dí)呢？那又(yòu)如(rú)何(hé)預防和處理呢？這篇文章讓我們一起(qǐ)了(liǎo)解一下吧！一，PCR嵌合體是(shì)什麼PCR嵌(qiàn)合體(ChimericProducts)：PCR擴增反(fǎn)應(yīng)中的(dí)嵌合體(tǐ)是(shì)指(zhǐ)一(yī)個PCR產(chǎn)物(wù)來自兩(liǎng)個或多(duō)個模(mó)板分(fēn)子，通(tōng)常(cháng)是(shì)由於延伸(shēn)未(wèi)完(wán)quan導致(zhì)的‌。這(zhè)種現象(xiàng)通(tōng)常發生在PCR反應中(zhōng)，特別是(shì)當使(shǐ)用(yòng)多(duō)重PCR或復(fù)雜模(mó)板時(shí)。嵌(qiàn)合體會導(dǎo)致(zhì)擴增產物中(zhōng)含(hán)有(yǒu)非(fēi)預(yù)期(qī)的片段，有(yǒu)可能會影響(xiǎng)實驗結(jié)果的(dí)準確性，甚至導致(zhì)錯誤(wù)的解(jiě)釋。二(èr)，形(xíng)成原(yuán)理在(zài)PCR反應(yīng)中，DNA模板在...
流(liú)式(shì)細胞(bāo)儀(yí)怎麼分選T細胞?
2024-11-18 上文介(jiè)紹(shào)了流式細(xì)胞術的原(yuán)理及(jí)應用，今天讓我們(mén)學習(xí)一下怎(zěn)麼用(yòng)流式(shì)細(xì)胞儀分選T細胞(bāo)吧(bā)~一，樣(yàng)本製(zhì)備1.取樣:取(qǔ)100μL抗(kàng)凝(níng)血。2.標記：根據(jù)抗(kàng)體說明書標(biāo)記(jì)實(shí)驗管。混(hùn)匀(yún)後，室溫避光孵育(yù)15分鐘。3.溶血：將(jiāng)10×裂(liè)紅(hóng)液用(yòng)水稀釋10倍，每(měi)管加入1mL，振(zhèn)蕩器混(hùn)匀(yún)後室溫避(bì)光靜置10分鐘，300g，4°C離(lí)心5分鐘。4.洗滌：棄(qì)去(qù)上(shàng)清(qīng)，加(jiā)入1mL1×PBS洗液(yè)，300g離(lí)心洗滌(dí)5分(fēn)鐘，洗2-3次。5.上機檢(jiǎn)測(cè)：棄去(qù)上清後加入500μL1×PBS，混(hùn)匀(yún)懸浮後過濾，避光(guāng)等(děng)待上機檢(jiǎn)測。二，儀...

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