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慢(màn)病毒轉染貼壁細胞全(quán)流(liú)程詳(xiáng)解
2025-02-06 慢病毒轉(zhuǎn)染貼壁(bì)細(xì)胞全流程詳解(jiě)一，細(xì)胞(bāo)種(zhǒng)板將(jiāng)細胞種在12孔(kǒng)板中，每(měi)孔1.5×10^5個(gè)細胞(bāo)。每孔加入(rù)1mlwan全培養基(jī)。二，病(bìng)毒(dú)感染1.待細胞生長至30%～50%時開始轉染。2.將病毒從冰箱(xiāng)取出(chū)，放在冰上融(róng)化。3.打開生物安全(quán)櫃，關閉(bì)風機，戴好帽(mào)子和口(kǒu)罩(zhào)。4.棄去(qù)培(péi)養基，用PBS洗三次。5.每孔加入(rù)500ulwan全培養基(jī)。6.根(gēn)據(jù)公(gōng)式計算每(měi)孔(kǒng)所需病(bìng)毒量：每(měi)孔病毒(dú)量（μL）=MOIx細胞數(shù)/病毒滴度（TU/mL）×1000。7.4小時後，再(zài)向孔(kǒng)板中(zhōng)加(jiā)入500ulwan全培養基...
小(xiǎo)分子(zǐ)蛋(dàn)白(bái)的(dí)WB該如何？
2025-01-23 WB（WesternBlot）是一種常用(yòng)的(dí)生(shēng)物(wù)化學實(shí)驗技術(shù)，用於(yú)檢測和分(fēn)析蛋白樣品中特(tè)定蛋(dàn)白質的存在(zài)和表(biǎo)達(dá)水平(píng)。它(tā)通(tōng)過(guò)將樣(yàng)品中(zhōng)的(dí)蛋白質分離(lí)並轉移(yí)到膜上，然(rán)後使(shǐ)用(yòng)特定(dìng)的抗(kàng)體識別目(mù)標(biāo)蛋(dàn)白，並通過化學(xué)或免疫檢(jiǎn)測(cè)方法來(lái)可(kě)視(shì)化這些蛋(dàn)白(bái)質。WesternBlot技(jì)術(shù)通(tōng)常包(bāo)括樣品(pǐn)製(zhì)備，SDS-PAGE電泳分(fēn)離(lí)，蛋白轉(zhuǎn)印，封(fēng)閉和抗(kàng)體檢測，曝光(guāng)顯(xiǎn)影等步驟(zhòu)。目前(qián)WB被(bèi)廣泛(fàn)應(yīng)用於(yú)生物醫學(xué)研(yán)究中，用(yòng)於研究蛋白質(zhì)表(biǎo)達(dá)，翻(fān)譯後(hòu)修飾以(yǐ)及蛋(dàn)白(bái)質相互作用(yòng)等。圖1.WB流程圖在日常(cháng)實驗(yàn)過(guò)程中，小(xiǎo)分(fēn)子蛋(dàn)白(bái)是非(fēi)常常...
明明(míng)凍存的時候細胞長得好好的，怎(zěn)麼(mó)一(yī)復(fù)蘇就(jiù)完啦(lā)？
2025-01-21 不知道(dào)大(dà)家(jiā)是否會(huì)遇到細胞凍(dòng)存的時候狀態非(fēi)常不錯，結(jié)果等(děng)到(dào)需要(yào)用到(dào)該細胞的(dí)時(shí)候怎麼(mó)也復蘇不起來(lái)的情況啊(ā)？或許可能是凍存細胞(bāo)的時候(hòu)出現了什麼差錯？一(yī).細(xì)胞凍(dòng)存的原則：慢(màn)凍，細(xì)胞在冷(lěng)凍過(guò)程(chéng)中，如果降溫過快(kuài)，會形成大(dà)的(dí)冰晶，這(zhè)些(xiē)冰晶會(huì)破(pò)壞(huài)細(xì)胞(bāo)結(jié)構(gòu)，導致細胞(bāo)死亡。詳細(xì)版(bǎn)本見《細(xì)胞凍(dòng)存的(dí)原(yuán)理是什麼？》二.凍(dòng)存(cún)液的配置：常用(yòng)配置比(bǐ)例：培(péi)養(yǎng)基:血清:DMSO=7:2:1適(shì)用於大多(duō)數細胞係，能夠(gòu)保證細胞在(zài)凍存(cún)過程中(zhōng)有較(jiào)高的存(cún)活率。血(xiě)清(qīng):DMSO=9:1適(shì)用(yòng)範(fàn)圍：適(shì)用於(yú)需要長(cháng)時(shí)間(jiān)保存(cún)或者具有(yǒu)特(tè)別...
CCK8實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
2025-01-20 CellCountingKit-8（簡稱(chēng)CCK-8）試劑(jì)可用於簡便(biàn)而(ér)準確的進行細胞增殖和毒性分(fēn)析(xī)。基本原理(lǐ)：該試(shì)劑(jì)中含有(yǒu)WST-8【化(huà)學名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯(běn)基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯(běn))-2H-四唑(zuò)單鈉(nà)鹽】，它(tā)在電子(zǐ)載體(tǐ)1-甲氧基(jī)-5-甲基(jī)吩嗪(qín)鎓liu酸2甲酯(zhǐ)（1-MethoxyPMS）的作(zuò)用下被(bèi)細(xì)胞中(zhōng)的脫氫(qīng)酶(méi)還原(yuán)為(wéi)具有高度(dù)水溶(róng)性的黃色甲瓚產物（Formazandye）。生成(chéng)的(dí)甲瓚(zàn)物的數量與(yǔ)活(huó)細胞(bāo)的(dí)數(shù)量(liáng)成(chéng)正比。因(yīn)此可利用這一(yī)特性直接(jiē)進行細胞(bāo)增...
CCK8實驗一文就(jiù)懂！
2025-01-20 前麵我(wǒ)們(mén)在(zài)文(wén)章《為(wéi)什麼CCK8鏡下趨勢是對的(dí)，測出來的(dí)OD值卻不(bù)對(duì)？？》中cue到過(guò)CCK8實驗，那(nà)麼(mó)CCK8具體(tǐ)到(dào)底(dǐ)是什麼呢，讓我(wǒ)們今(jīn)天(tiān)一(yī)起(qǐ)詳細(xì)了解下(xià)吧~一，CCK-8實(shí)驗的基本定義(yì)與(yǔ)原理(lǐ)CCK-8實驗(yàn)是(shì)一種(zhǒng)廣泛應(yīng)用於(yú)細(xì)胞(bāo)生(shēng)物學研究的細(xì)胞增殖和毒性檢測方(fāng)法。其基本(běn)原理在於利(lì)用細(xì)胞(bāo)內的代(dài)謝(xiè)酶將無色(sè)的(dí)CCK-8試劑（CellCountingKit-8）中的(dí)WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯(běn)基)-3-(4-硝基(jī)苯(běn)基)-5-(2，4-二磺酸(suān)苯(běn))-2H-四唑單鈉鹽）還(huán)原為(wéi)具(jù)有高...
流式細胞(bāo)術的(dí)特點及應(yīng)用
2025-01-17 一，流式細胞(bāo)術(shù)特點速(sù)度(dù)快(kuài):流式細胞(bāo)術是(shì)一(yī)種快(kuài)速(sù)的(dí)實(shí)驗技術(shù)，通過對單個(gè)細(xì)胞(bāo)或(huò)生(shēng)物顆粒進行逐個(gè)檢(jiǎn)測(cè)，測(cè)量速度可(kě)達每(měi)秒(miǎo)數千(qiān)甚(shèn)至上萬(wàn)個細胞。靈(líng)敏(mǐn)度(dù)高(gāo):每(měi)個細胞隻需帶(dài)有1000~3000個(gè)熒光(guāng)分(fēn)子(zǐ)，流式(shì)細胞術就(jiù)能(néng)夠準確檢測出(chū)來。這種高(gāo)靈敏度的(dí)特性使得(dé)流式細(xì)胞術(shù)成為研(yán)究(jiū)復雜(zá)生(shēng)物係(xì)統和細胞內分子水(shuǐ)平(píng)變化(huà)的(dí)重(zhòng)要(yào)工(gōng)具。多參(cān)數:可應(yīng)用於(yú)多參(cān)數(shù)分析(xī)，通(tōng)過多(duō)色熒(yíng)光染色(sè)同時對單個(gè)細胞或生物(wù)顆粒(lì)的多(duō)種特(tè)征(zhēng)進(jìn)行細(xì)致(zhì)分析。這種(zhǒng)高度(dù)精密(mì)的方法使(shǐ)研(yán)究(jiū)人(rén)員能夠深(shēn)入(rù)研(yán)究細胞的(dí)內部(bù)結構(gòu)和功能，為疾病診(zhěn)斷(duàn)和(hé)治療(liáo)提(tí)供(gōng)重要...
兩種(zhǒng)流式細胞(bāo)儀(yí)，你選(xuǎn)哪種？
2025-01-16 分析(xī)型(xíng)流式細(xì)胞儀(yí)檢測(cè)原(yuán)理將(jiāng)待測樣(yàng)品製成單細胞(bāo)懸(xuán)液，在(zài)鞘(qiào)液的(dí)包裹下進入流(liú)式(shì)細胞儀內的檢測(cè)區域，細(xì)胞在(zài)激光(guāng)的照(zhào)射下會發生散(sàn)射和折射(shè)，產(chǎn)生的散射光信(xìn)號和(hé)熒光信號由(yóu)不同(tóng)的通道接收。其中前向(xiàng)角(jiǎo)散射光（FSC）的(dí)強度與細(xì)胞(bāo)直(zhí)徑(jìng)成(chéng)正相關，可以理解為細胞直(zhí)徑越(yuè)大(dà)，FSC越(yuè)強，細胞直徑越小(xiǎo)，FSC越弱(ruò)。所(suǒ)以可以(yǐ)利用(yòng)細胞(bāo)的FSC值初步(bù)比(bǐ)較細胞的大(dà)小(xiǎo)，利(lì)用FSC值對(duì)細胞(bāo)進(jìn)行分(fēn)群和分(fēn)類。側向角(jiǎo)散(sàn)射(shè)光(guāng)（SSC）的(dí)強度與(yǔ)細胞(bāo)內(nèi)顆粒(lì)結構(gòu)復雜程度成正相(xiāng)關(guān)（與(yǔ)細胞(bāo)中所(suǒ)含的(dí)細胞器，細胞(bāo)核(hé)等(děng)的數量成正(zhèng)比(bǐ)），可以理(lǐ)...
流式細胞術(shù)一(yī)文(wén)Get
2025-01-16 一，流式細(xì)胞(bāo)術(shù)流式(shì)細胞(bāo)術（FlowCytometry，FCM）從字(zì)麵意(yì)義(yì)理(lǐ)解，Flow—Fluid，Cyto—Cell，Metry—Measurement，是一種(zhǒng)對(duì)液流中排成單(dān)列(liè)的(dí)細胞(bāo)或其(qí)它(tā)生物微粒（如微球，細菌，小(xiǎo)型(xíng)模(mó)式生物(wù)等）逐個(gè)進行(háng)快速定(dìng)量(liáng)分析和(hé)分選的技(jì)術(shù)。其特(tè)點(diǎn)是通(tōng)過(guò)快(kuài)速測定庫(kù)爾特電(diàn)阻(zǔ)，熒光(guāng)，光散射(shè)和光吸收來定量測定(dìng)細胞DNA含(hán)量(liáng)，細胞(bāo)體(tǐ)積，蛋(dàn)白質含(hán)量(liáng)，酶(méi)活(huó)性，細胞(bāo)膜受體(tǐ)和表(biǎo)麵抗(kàng)原等許(xǔ)多重要參數。根據這(zhè)些參數將不(bù)同性(xìng)質(zhì)的細(xì)胞(bāo)分(fēn)開(kāi)，以獲得(dé)供(gōng)生物學和醫(yī)學(xué)研(yán)究用(yòng)的純(chún)細(xì)胞群體...

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